Modello Xenotrapianto eterogeneo derivato dal paziente del cancro pancreatico utilizzando larve di pesce zebra come ospiti per la valutazione comparativa del farmaco

Lei Wang; Huan Chen; Fei Fei; Xianfeng He; Shaoyang Sun; Kunpeng Lv; Bo Yu; Jiang Long; Xu Wang

doi:10.3791/59507

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Articolo metodologico

Modello Xenotrapianto eterogeneo derivato dal paziente del cancro pancreatico utilizzando larve di pesce zebra come ospiti per la valutazione comparativa del farmaco

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DOI:

10.3791/59507

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30 aprile 2019

Lei Wang^*¹ , Huan Chen^*²^,³ , Fei Fei^*¹ , Xianfeng He²^,³ , Shaoyang Sun¹ , Kunpeng Lv¹ , Bo Yu²^,³ , Jiang Long²^,⁴^,⁵^,⁶ , Xu Wang¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Key Laboratory of Metabolism and Molecular Medicine, Ministry of Education, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, ²National Human Genetic Resources Sharing Service Platform (2005DKA21300), ³Fudan University Shanghai Cancer Center, ⁴Department of Pancreatic Surgery, Fudan University Shanghai Cancer Center, ⁵Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, ⁶Pancreatic Cancer Institute, Fudan University

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive le procedure di ottimizzazione in un modello di xenotrapianto tumorale a doppia fluorescenza basato su virus utilizzando il pesce zebra larva come ospiti. Questo modello xenotrapianto eterogeneo imita la composizione tissutale del microambiente del cancro al pancreas in vivo e funge da strumento più preciso per valutare le risposte ai farmaci in modelli personalizzati zPDX (zebrafish patient-derived xenogrft).

Abstract

Lo xenotrapianto tumorale derivato dal paziente (PDX) e lo xenotrapianto tumorale derivato dalle cellule (CDX) sono tecniche importanti per la valutazione preclinica, la guida medica e le ricerche di base sul cancro. Generazioni di modelli PDX in topi host tradizionali richiedono molto tempo e lavorano solo per una piccola parte di campioni. Recentemente, il PDX del pesce zebra (zPDX) è emerso come un sistema host unico, con le caratteristiche di piccola e alta efficienza. Qui, descriviamo una metodologia ottimizzata per la generazione di un modello di xenotrapianto tumorale a doppia fluorescenza per la valutazione chemioterapia comparativa nei modelli zPDX. Le cellule tumorali e i fibroblasti sono stati arricchiti da tessuti tumorali pancreatici appena raccolti o congelati in diverse condizioni di coltura. Entrambi i gruppi cellulari sono stati etichettati dal lentivirus che esprime proteine fluorescenti verdi o rosse, così come un gene anti-apoptosi BCL2L1. Le cellule trasfette sono state pre-miscelate e co-iniettate nel pesce zebra larvale 2 dpf che sono stati poi allevati in un mezzo E3 modificato a 32 gradi centigradi. I modelli di xenotrapianto sono stati trattati con farmaci chemioterapici e/o inibitori di BCL2L1, e le vibilità di entrambe le cellule tumorali e i fibroblasti sono stati studiati simultaneamente. In sintesi, questo protocollo consente ai ricercatori di generare rapidamente una grande quantità di modelli zPDX con un microambiente tumorale eterogeneo e fornisce una finestra di osservazione più lunga e una quantificazione più precisa nella valutazione dell'efficienza dei farmaci candidati.

Introduzione

L'oncologia di precisione mira a trovare le strategie terapeutiche più vantaggiose per il singolo paziente¹. Attualmente, numerosi modelli preclinici come la coltura primaria in vitro, la coltura organoide in vitro²e gli xenografifti derivati dal paziente (PDX) nei topi prima o dopo la coltura organoide sono proposti per la diagnosi e per vagliare/valutare il potenziale scelte terapeutiche³. Modello PDX generato dall'iniezione di cellule tumorali primarie umane in topi immunocompromessi, è uno degli strumenti più promettenti per lo screening farmacologico personalizzato in oncologia clinica