Questo protocollo descrive un modello murino di fibrosi intestinale guidata da Salmonella che assomiglia ai segni chiave della malattia patologica della malattia di Crohn, tra cui l'infiammazione transmurale e la fibrosi. Questo metodo può essere utilizzato per valutare i fattori ospiti che alterano gli esiti fibrotici utilizzando topi mutanti mantenuti su un background genetico C57Bl/6.
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Articolo metodologico
Infezione da Salmonella cronica Fibrosi intestinale indotta
In questo articolo
Sommario
Abstract
La fibrosi tissutale caratterizzata dall'accumulo patologico di matrice extracellulare come il collagene è il risultato di un'infiammazione persistente e di una riparazione slogata. Nella malattia infiammatoria intestinale (IBD), la fibrosi porta a formazioni di stenosi ricorrenti per le quali non esiste una terapia efficace diversa dalla resezione chirurgica. A causa della sua esordio tardivo, i processi che guidano la fibrosi sono meno studiati e in gran parte sconosciuti. Pertanto, le complicazioni fibrotiche rappresentano una sfida importante nell'IBD. In questo protocollo, viene descritto un robusto modello in vivo di fibrosi intestinale in cui la streptonomina pre-trattamento dei topi C57Bl/6, seguiti da gavage orale con Salmonella Typhimurium, mutante di grado fibrosi del cecum. Metodologie per la preparazione di S. Typhimurium - AroA per l'inoculazione, quantificando i carichi patogeni nel cecum e nella milza e valutando la deposizione di collagene nei tessuti intestinali sono spiegati. Questo modello di malattia sperimentale è utile per esaminare i fattori ospiti che migliorano o esacerbano la fibrosi intestinale simile a un CD.
Introduzione
La colite ulcerosa (UC) e la malattia di Crohn (CD) sono le due principali forme di IBD e sono caratterizzate da disturbi infiammatori cronici e recidivi del tratto gastrointestinale 1,2. Questi disturbi hanno un impatto importante sulla qualità della vita dei pazienti. I sintomi di IBD includono dolore addominale, diarrea, nausea, perdita di peso, febbre, e affaticamento3. Studi recenti hanno identificato fattori genetici e ambientali che contribuiscono alla patogenesi della malattia; si ritiene che tali fattori di rischio contribuiscano all'interruzione della barriera epiteliale con c....
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Protocollo
Tutti i protocolli sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la cura degli animali dell'Università della Columbia Britannica.
1. Preparazione delle colture Salmonella Typhimurium - AroA per il gavage orale dei topi
- Da uno stock di glicerolo congelato di S. Typhimurium - AroA, preparare una piastra di striatura utilizzando agar LB contenente 100 streptomicina streptomicina con un anello sterile di inoculazione. Incubare per tutta la notte a 37 gradi centigradi. Le piastre di streak possono essere conservate fino a una settimana a 4 gradi centigradi.
- Un giorno prima dell'infezione, preparare l'a....
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Risultati
Trattamento con Streptomicina seguito da infezione orale con S. Il cplotto - AroA porta a una robusta infiammazione intestinale e fibrosi soprattutto nel cecum (Figura 1). I relativi oneri patogeni di 108-10 9 CFU per 1 g di cecum e 104 CFU per 1 g di milza possono essere recuperati da animali infetti ( Figura2). La valutazione della fibrosi nelle sezioni del ceca rosso picrosiro indicano la fibrosi di picco 21 giorni do.......
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Discussione
La nostra comprensione della patogenesi dell'IBD è stata notevolmente migliorata da modelli murini di infiammazione intestinale. Anche se tali singoli modelli non ricapitolano tutte le caratteristiche della malattia umana complessa e multifattoriale, sono stati utili per identificare le caratteristiche chiave della progressione della malattia. Le stenosi fibrotiche associate all'IBD rimangono un'importante necessità clinica non soddisfatta, in quanto gli attuali trattamenti sono inefficaci nell'inversione dello sviluppo .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti finanziari di interesse da divulgare.
Ringraziamenti
Ringraziamo Ingrid Barta per i servizi di istologia.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Provette con blocco di sicurezza a fondo tondo da 2 ml | Eppendorf | 22363344 | |
| Perline in acciaio inossidabile | Qiagen | 69989 | |
| PBS | Gibco | 10010031 | |
| Punte per pipette a grande orifizio | Fisher | 2707134 | |
| 2 ml piastre megablock | Sarstedt | 82.1972.002 | |
| Aghi per gavage | FST | 18061-22 | |
| Streptomicina solfato | Sigma | S9137 | |
| Vibromulino | Retsch | MM |
Riferimenti
- Danese, S., Fiocchi, C. Ulcerative colitis. New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).
- Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. Crohn's disease. The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).
- Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J.
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Ristampe e permessi
