Mitrai NOG umanizzati per l'esposizione all'HIV intravaginale e il trattamento dell'infezione da HIV

Anna  H. F. Andersen; Stine  S. F. Nielsen; Rikke Olesen; Katharina Mack; Frederik Dagnæs-Hansen; Niels Uldbjerg; Lars Østergaard; Ole  S. Søgaard; Paul  W. Denton; Martin Tolstrup

doi:10.3791/60723

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Articolo metodologico

Mitrai NOG umanizzati per l'esposizione all'HIV intravaginale e il trattamento dell'infezione da HIV

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DOI:

10.3791/60723

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31 gennaio 2020

Anna H. F. Andersen¹^,² , Stine S. F. Nielsen¹^,² , Rikke Olesen¹^,² , Katharina Mack¹ , Frederik Dagnæs-Hansen³ , Niels Uldbjerg¹^,⁴ , Lars Østergaard¹^,² , Ole S. Søgaard¹^,² , Paul W. Denton¹^,²^,⁵ , Martin Tolstrup¹^,²

¹Department of Clinical Medicine, Aarhus University, ²Department of Infectious Diseases, Aarhus University Hospital, ³Department of Biomedicine, Aarhus University, ⁴Department of Gynecology and Obstetrics, Aarhus University Hospital, ⁵Department of Biology, University of Nebraska at Omaha

In questo articolo

Sommario

Abbiamo sviluppato un protocollo per la generazione e la valutazione di un modello murino NOG infettato da virus dell'immunodeficienza umana e umile basato sul trapianto di cellule staminali, sull'esposizione al virus dell'immunodeficienza umana intravaginale e sull'RNA PCR digitale a goccia e droplet Quantificazione.

Abstract

I topi umanizzati forniscono una piattaforma sofisticata per studiare la virologia del virus dell'immunodeficienza umana (HIV) e per testare i farmaci antivirali. Questo protocollo descrive la creazione di un sistema immunitario umano nei topi NOG adulti. Qui, spieghiamo tutti i passaggi pratici dall'isolamento delle cellule CD34 umane derivate dal sangue del cordone ombelicale e il loro successivo trapianto endovenoso nei topi, alla manipolazione del modello attraverso l'infezione da HIV, alla terapia antiretrovirale combinata ( cART), e il campionamento del sangue. Circa 75.000 cellule hCD34 vengono iniettate per via endovenosa nei topi e il livello di chimerismo umano, noto anche come umanizzazione, nel sangue periferico è stimato longitudinalmente per mesi dalla citometria di flusso. Un totale di 75.000 cellule hCD34 produce cellule CD45 per un totale di 75.000 hCD34 nel sangue periferico. I topi sono suscettibili all'infezione intravaginale da HIV e il sangue possono essere campionati una volta alla settimana per l'analisi e due volte al mese per periodi prolungati. Questo protocollo descrive un saggio per la quantificazione del carico virale al plasma utilizzando la PCR digitale delle goccionelline (ddPCR). Mostriamo come i topi possono essere trattati efficacemente con un regime cART standard-of-care nella dieta. La consegna di cART sotto forma di chow topo regolare è un significativo affinamento del modello sperimentale. Questo modello può essere utilizzato per l'analisi preclinica di composti di profilassi pre-esposizione sia sistemici che topici, nonché per testare nuovi trattamenti e strategie di cura dell'HIV.

Introduzione

Il virus dell'immunodeficienza umana (HIV) è un'infezione cronica con più di 37 milioni di individui infetti in tutto il mondo¹. La terapia antivirale combinata (cART) è una terapia salvavita, ma una cura è ancora giustificata. Pertanto, vi è la necessità di modelli animali che rispecchiano il sistema immunitario umano e le sue risposte al fine di facilitare la ricerca continua sull'HIV. Sono stati sviluppati diversi tipi di topi umanizzati che sono in grado di supportare l'innesto di cellule e tessuti trapiantando cellule umane in topi gravemente immunosensibili². Tali topi umanizzati sono suscettibili all'infezione da ....