Colorazione immunoistochimica fluorescente multiplexata di quattro tipi di cellule immunitarie endometriali in aborto spontaneo ricorrente

Yiwei Zhao; Gene Chi Wai Man; Loucia Kit Ying Chan; Xi Guo; Yingyu Liu; Tao Zhang; Joseph Kwong; Chi Chiu Wang; Xiaoyan Chen; Tin Chiu Li

doi:10.3791/62931

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Articolo metodologico

Colorazione immunoistochimica fluorescente multiplexata di quattro tipi di cellule immunitarie endometriali in aborto spontaneo ricorrente

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DOI:

10.3791/62931

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4 agosto 2021

Yiwei Zhao¹ , Gene Chi Wai Man¹^,² , Loucia Kit Ying Chan¹ , Xi Guo¹ , Yingyu Liu³ , Tao Zhang¹ , Joseph Kwong¹^,⁴ , Chi Chiu Wang¹^,⁵ , Xiaoyan Chen³ , Tin Chiu Li¹

¹Department of Obstetrics and Gynaecology, The Chinese University of Hong Kong, Prince of Wales Hospital, ²Department of Orthopaedics and Traumatology, The Chinese University of Hong Kong, Prince of Wales Hospital, ³Department of Obstetrics and Gynaecology, Shenzhen Baoan Women’s and Children’s Hospital, Shenzhen University, ⁴School of Medicine, Faculty of Medicine and Health Sciences, Keele University, ⁵Li Ka Shing Institute of Health Sciences; School of Biomedical Sciences, The Chinese University of Hong Kong

In questo articolo

Sommario

Nonostante i progressi nell'immunoistochimica multiplex e nell'imaging multispettrale, caratterizzare la densità e il raggruppamento delle principali cellule immunitarie contemporaneamente nell'endometrio rimane una sfida. Questo documento descrive un protocollo dettagliato di colorazione multiplex e l'imaging per la localizzazione simultanea di quattro tipi di cellule immunitarie nell'endometrio.

Abstract

L'immunoistochimica è il metodo più comunemente usato per l'identificazione e la visualizzazione degli antigeni tissutali nella ricerca biologica e nella diagnostica clinica. Può essere utilizzato per caratterizzare vari processi biologici o patologie, come la guarigione delle ferite, la risposta immunitaria, il rigetto dei tessuti e le interazioni tessuto-biomateriale. Tuttavia, la visualizzazione e la quantificazione di più antigeni (specialmente per le cellule immunitarie) in una singola sezione di tessuto utilizzando la colorazione immunoistochimica convenzionale (IHC) rimane insoddisfacente. Pertanto, negli ultimi anni sono state introdotte tecnologie multiplexed per identificare più marcatori biologici in un singolo campione di tessuto o in un insieme di diversi campioni di tessuto.

Queste tecnologie possono essere particolarmente utili per differenziare i cambiamenti nelle interazioni immuno cellula-cellula all'interno dell'endometrio tra donne fertili e donne con aborti ricorrenti durante l'impianto. Questo documento descrive un protocollo dettagliato per la colorazione IHC a fluorescenza multiplexata per studiare la densità e il raggruppamento di quattro principali tipi di cellule immunitarie contemporaneamente in campioni endometriali temporizzati con precisione durante l'impianto dell'embrione. Il metodo prevede la preparazione del campione, l'ottimizzazione multiplex con marcatori per i sottotipi di cellule immunitarie e la scansione dei vetrini, seguita dall'analisi dei dati, con specifico riferimento alla rilevazione delle cellule immunitarie endometriali.

Utilizzando questo metodo, la densità e il raggruppamento di quattro principali tipi di cellule immunitarie nell'endometrio possono essere analizzati simultaneamente in una singola sezione di tessuto. Inoltre, questo documento discuterà i fattori critici e la risoluzione dei problemi per superare possibili interferenze fluoroforiche tra le sonde fluorescenti applicate. È importante sottolineare che i risultati di questa tecnica di colorazione multiplex possono aiutare a fornire una comprensione approfondita dell'interazione immunologica e della regolazione durante l'impianto dell'embrione.

Introduzione

L'aborto spontaneo ricorrente (RM) può essere definito come la perdita di due o più gravidanze prima delle 24 settimane di^{gestazione 1}. Questa condizione riproduttiva frequente colpisce fino all'1% delle coppie in tutto il mondo^2,^3. La fisiopatologia è multifattoriale e può essere suddivisa in cause embriologicamente guidate (principalmente a causa di un cariotipo embrionale anormale) e cause guidate dalla madre che influenzano lo sviluppo dell'endometrio e / o della placenta. Questa manifestazione può derivare da anomalie genetiche parentali, anomalie uterine, condizioni protrombotiche....