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Articolo metodologico

Un modello affidabile di lembo fascio-cutaneo suino per studi di bioingegneria di allotrapianti compositi vascolarizzati

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DOI:

10.3791/63557

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31 marzo 2022

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In questo articolo

Sommario

Il presente protocollo descrive il modello di lembo fascio-cutaneo suino e il suo potenziale utilizzo nella ricerca sui tessuti compositi vascolarizzati.

Abstract

Gli allotrapianti compositi vascolarizzati (VCA) come il trapianto di mano, viso o pene rappresentano il trattamento all'avanguardia per i difetti devastanti della pelle, falliti dai primi passi della scala ricostruttiva. Nonostante i risultati estetici e funzionali promettenti, il principale fattore limitante rimane la necessità di un'immunosoppressione permanente drasticamente applicata e i suoi ben noti rischi medici, prevenendo indicazioni più ampie. Pertanto, sollevare la barriera immunitaria nella VCA è essenziale per ribaltare la scala etica e migliorare la qualità della vita dei pazienti utilizzando le tecniche chirurgiche più avanzate. La creazione de novo di un innesto specifico per il paziente è l'imminente svolta nel trapianto ricostruttivo. Utilizzando tecniche di ingegneria tissutale, i VCA possono essere liberati dalle cellule donatrici e personalizzati per il ricevente attraverso perfusione-decellularizzazione-ricellularizzazione. Per sviluppare queste nuove tecnologie, è necessario un modello VCA animale su larga scala. Quindi, i lembi fascio-cutanei suini, composti da pelle, grasso, fascia e vasi, rappresentano un modello ideale per studi preliminari in VCA. Tuttavia, la maggior parte dei modelli VCA descritti in letteratura includono muscoli e ossa. Questo lavoro riporta una tecnica affidabile e riproducibile per la raccolta di lembo fascio-cutaneo safeno nei suini, uno strumento pratico per vari campi di ricerca, in particolare l'ingegneria dei tessuti compositi vascolarizzati.

Introduzione

Gli allotrapianti compositi vascolarizzati (VCA) hanno rivoluzionato il trattamento delle perdite di parti del corpo difficili da riparare, come mani, viso e pene 1,2,3. Sfortunatamente, i primi risultati a lungo termine4 hanno dimostrato che la somministrazione permanente di agenti immunosoppressori ad alte dosi può portare a gravi condizioni mediche collaterali, tra cui diabete, infezioni, neoplasie e disfunzione reno-vascolare5. Ultimamente, team esperti di VCA hanno dovuto gestire il rischio di rigetto cronico che porta alla....

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Protocollo

Tutti gli animali hanno ricevuto cure umane seguendo la Guida del National Institute of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. Il Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali ha approvato il protocollo sperimentale (protocollo IACUC #2020N000015). Sette femmine di maiali dello Yorkshire (20-25 kg) sono stati utilizzati per tutti gli esperimenti.

1. Cure preoperatorie

  1. Digiunare l'animale per il cibo solido 12 ore prima dell'intervento.
  2. Sedare l'animale con 4,4 mg/kg di telazolo, 2,2 mg/kg di xilazina e 0,04 mg/kg (IM) di atropina solfato (vedere Tabella dei materiali<....

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Risultati

Questo lavoro su animali vivi è stato preceduto dalla determinazione del perforasoma safeno su tre campioni cadaverici (Figura 2). Una soluzione di riempimento colorata è stata iniettata nell'arteria safena per opacizzare la specifica rete vascolare proveniente dall'arteria. La soluzione è composta da 10 mL di agente glicerina di colore blu miscelato con 10 mL di agente diluente (vedere Tabella dei materiali). Ciò ha generato una mappa colorata della pelle vascolarizzata dal.......

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Discussione

Questo articolo descrive un lembo fasciocutaneo affidabile e riproducibile raccolto sugli arti posteriori dei suini. Seguendo questo protocollo chirurgico passo-passo sarà possibile l'approvvigionamento di due lembi su un solo animale in meno di 2 ore. Il passo più critico dell'intervento chirurgico è la scheletrizzazione del peduncolo vascolare all'interno delle fibre muscolari gracili, che richiede una dissezione approfondita da parte di un chirurgo esperto. Fissare la pelle alla fascia utilizzando suture cutanee è un .......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato finanziato dalle sovvenzioni Shriners Hospitals for Children #85127 (BEU e CLC) e #84702 (AA). Gli autori desiderano ringraziare la fondazione "Gueules Cassées" per il sostegno salariale ai borsisti coinvolti in quel progetto.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Angiocatheter 18 GBD Insyte Autoguard381409
Angiocatheter 20 GBD Insyte Autoguard381411
pinza per tessuti Adson, 11 cm, 1 x 2 denti con piattaforma di legaturaASSIASSI.
Atropina solfatoAdvaCare212-868
Cordoni bipolariASSI228000C
Buprenorfina HClPharmaceutical, Inc42023-179-01
Pinze dilatatriciStrumenti per la scienza fine (FST)18131-12
Tubo endotrachelicoJorgensen LabsJO615Xdimensioni da 6 a 15 mm a seconda del peso del maiale
Ethilon 3-0 16 mm 3/8EthiconMPVCP683H
EuthasolVirbac AH200-071
Heparin Lock Flush Solution, USP, 100 unità/mLBD PosiFlush306424
IsofluranePatterson Veterinary14043-704-06
Pinza bipolare per gioiellieri antiaderente 11 cm, punta dritta, diametro della punta di 0,25 mmASSIASSI.
Forbici Metzenbaum 180 mmB BraunBC606R
Microfil bluFlow techLMV-120
Diluizione MicrofilFlow techLMV-112soluzione di limatura colorata
Coltello monopolareASSI221230C
N° 15 lama bisturiSwann MortonNS11
OmnipaqueGeneral Electric4080358prodotto a contrasto
Perma-Hand Silk 3-0EthiconA184H
Small LigaclipEthiconMCM20
Stevens forbici 115 mmB BraunBC008R
TelazolZoetis106-111
Xilamed (xilazina)Bimeda200-529
ATK26426BPNS11223

Riferimenti

  1. Dubernard, J. M., et al. Human hand allograft: Report on first 6 months. The Lancet. 353 (9161), 1315-1320 (1999).
  2. Meningaud, J. P., et al. Procurement of total human face graft for allotransplantation: A preclinical st....

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Ristampe e permessi

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