Questo protocollo fornisce una procedura passo-passo per l'esecuzione della somministrazione di dosi multiple in bolo endovenoso e il monitoraggio emodinamico invasivo nei topi. I ricercatori possono utilizzare questo protocollo per il futuro screening dei composti terapeutici per l'ipertensione arteriosa polmonare.
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Articolo metodologico
Dosaggio multiplo in bolo endovenoso e valutazione emodinamica invasiva in un modello murino di ipertensione arteriosa polmonare indotta da ipossia
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'ipertensione arteriosa polmonare (PAH) è una malattia progressiva potenzialmente letale, che colpisce principalmente le piccole arteriole polmonari del polmone. Attualmente, non esiste una cura per la PAH. È importante scoprire nuovi composti che possono essere utilizzati per trattare la PAH. Il modello di PAH indotto dall'ipossia murina è un modello ampiamente utilizzato per la ricerca sulla PAH. Questo modello riassume le manifestazioni cliniche umane della malattia PAH di gruppo 3 ed è un importante strumento di ricerca per valutare l'efficacia di nuove terapie sperimentali per la PAH. La ricerca che utilizza questo modello richiede spesso la somministrazione di composti nei topi. Per un composto che deve essere somministrato direttamente nel flusso sanguigno, l'ottimizzazione della somministrazione endovenosa (IV) è una parte fondamentale delle procedure sperimentali. Idealmente, il sistema di iniezione endovenosa dovrebbe consentire più iniezioni in un determinato periodo di tempo. Sebbene il modello di PAH indotto dall'ipossia murina sia molto popolare in molti laboratori, è tecnicamente difficile eseguire il dosaggio di più boli endovenosi e la valutazione emodinamica invasiva in questo modello. In questo protocollo, presentiamo istruzioni passo-passo su come eseguire il dosaggio di boli endovenosi multipli attraverso la vena giugulare di topo ed eseguire il cateterismo arterioso e del ventricolo destro per la valutazione emodinamica nel modello di PAH indotto dall'ipossia del topo.
Introduzione
L'ipertensione arteriosa polmonare (PAH) è definita da una pressione sistolica media dell'arteria polmonare superiore a 20 mmHg a riposo 1,2. Si tratta di una malattia progressiva e fatale, caratterizzata da un aumento prolungato della pressione arteriosa polmonare, che porta al sovraccarico del ventricolo destro e, infine, alla morte per insufficienza ventricolare destra1. Attualmente, non esiste una cura per la PAH.
L'uso di modelli animali di ipertensione polmonare è importante per testare l'efficacia delle terapie sperimentali per la PAH. Tra questi model....
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Protocollo
Tutte le procedure sugli animali sono state eseguite secondo i protocolli approvati dai Comitati Istituzionali per la Cura e l'Uso degli Animali dell'Università di Yale.
1. Preparazione di animali, strumenti, apparecchiature per la misurazione della pressione sanguigna e camera di ipossia
- Acclimatazione degli animali.
NOTA: Gli animali da esperimento utilizzati per questo studio erano topi maschi C57BL/6 di 8 settimane del peso di 25-27 g. Diversi fattori devono essere considerati quando si stima il numero di animali necessari per l'esperimento, tra cui la mortalità associata all'intervento chirurgico, le compl....
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Risultati
L'anestesia spesso riduce la pressione sanguigna. Pertanto, è stata utilizzata una dose minima di anestesia per abolire i movimenti in risposta a uno stimolo nocivo. L'accesso riuscito alla camera ventricolare destra può essere visualizzato mentre la forma d'onda emodinamica cambia in diverse regioni dei sistemi venosi (Figura 8).
In questo studio, i topi sono stati assegnati in modo casuale al gruppo normossico (21% O2 ) (n = 10), al gruppo ipossia (10.......
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Discussione
Diversi modelli animali di ipertensione polmonare sono stati stabiliti per imitare gli eventi di elevata resistenza vascolare polmonare nei soggetti umani. Tra questi, il modello di PAH indotto dall'ipossia del topo è stato ampiamente utilizzato per valutare l'efficacia di nuove terapie sperimentali per la PAH. La ricerca che utilizza questo modello richiede spesso la somministrazione di composti ai topi. Rispetto ad altri protocolli pubblicati per l'iniezione endovenosa (IV) e la valutazione emodinamica invasiva, questo.......
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Dichiarazioni
K Zsebo, M Simons e P-Y Chen sono fondatori scientifici e azionisti di VasoRx, Inc. M Simons è membro del comitato consultivo scientifico di VasoRx, Inc. HJ Duckers è un dipendente e azionista di VasoRx. Gli altri autori dichiarano di non avere interessi contrastanti.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto, in parte, da un Joint Biology Consortium Microgrant fornito nell'ambito della sovvenzione NIH P30AR070253 (PYC), del Fondo per l'educazione alla ricerca medica cardiovascolare (PYC), del VasoRx, Inc. Fund (MS) e delle sovvenzioni NIH HL135582 (MS), HL152197 (MS).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Confezione di sutura in prolene 5-0 | Ethicon | 8698G | per la chiusura dell'incisione |
| Confezione di sutura in nylon 8-0 | AROSurgical Instruments | T06A08N14-13 | per legatura |
| Camera di induzione per anestesia | VETEQUIP | #941444 | Trattiene l'animale durante l'esposizione all'anestesia |
| Cavo di interfaccia del catetere PEC-4D | Millar | per il collegamento del catetere Millar Mikro-Tip al PCU-2000 | |
| Filtri a tanica di carbone | VETEQUIP | #931401 | per aiutare a rimuovere anestetico di scarto gas |
| Tamponi di cotone | McKesson | 24-106 | per applicare pressione al sito di iniezione per prevenire il sanguinamento |
| Forbici fini | scienza fine | 14059-11 | Strumenti chirurgici |
| Siringa da insulina 28 G | EXEL | 26027 | per iniezione endovenosa giugulare |
| Isoflurano | COVETRUS | #029405 | per anestesia del topo |
| Software LabChart 8 | per l'analisi | dei | |
| Catetere a pressione Mikro-Tip SPR-1000 (1.0 F) | Millar | per la misurazione invasiva della pressione sanguigna | |
| Ago-25 G | BD | 305124 | per praticare un piccolo foro in un vaso |
| Controllore di ossigeno Sensore di ossigeno ProOx | BioSpherix | E702 | per il monitoraggio della concentrazione di ossigeno |
| PCU-2000 Unità di controllo della pressione | Millar | per il collegamento del catetere Millar Mikro-Tip a PowerLab 4/35 | |
| PowerLab 4/35 | ADInstruments | for Data Acquisition. L'investigatore deve collegare il PowerLab 4/35 a un laptop personale contenente il software LabChart 8 per il funzionamento. | |
| Prism 8 | GraphPad | per la statistica e la grafica scientifica | |
| Camera per ipossia semisigillabile | BioSpherix | un ambiente artificiale che simula le condizioni di alta quota per gli animali | |
| Forbici a molla | Strumenti per le scienze | 15021-15 | Strumenti chirurgici |
| Pinzetta stile 4 | Microscopia elettronica Scienze | 0302-4-PO | Strumenti chirurgici |
| VasoRx composto 7C1/let-7 miRNA | VasoRx, Inc. | Lotto # B2-L-16Apr | IV composto per iniezione VIP |
| 3000 Vaporizzatore veterinario | COLONIAL MEDICAL SUPPLY CO., INC. | per un'erogazione accurata dell'anestesia |
Riferimenti
- McLaughlin, V. V., McGoon, M. D. Pulmonary arterial hypertension. Circulation. 114 (1), 1417-1431 (2006).
- Hoeper, M. M., Humbert, M. The new haemodynamic definition of pulmonary hypertension: evidence prevails, finally. European Respiratory Journal. 53....
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Ristampe e permessi
