Attualmente, l'angiografia con fluoresceina (FA) è il metodo preferito per identificare i modelli di perdita nei modelli animali di neovascolarizzazione coroideale (CNV). Tuttavia, la FA non fornisce informazioni sulla morfologia vascolare. Questo protocollo delinea l'uso dell'angiografia con verde di indocianina (ICGA) per caratterizzare diversi tipi di lesioni di CNV indotta da laser in modelli murini.
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Articolo metodologico
Caratterizzazione della morfologia vascolare della degenerazione maculare neovascolare legata all'età mediante angiografia con verde indocianina
In questo articolo
Sommario
Abstract
La degenerazione maculare legata all'età (AMD) è una delle principali cause di cecità tra gli anziani e la sua prevalenza è in rapido aumento a causa dell'invecchiamento della popolazione. La neovascolarizzazione coroideale (CNV) o AMD umida, che rappresenta il 10%-20% di tutti i casi di AMD, è responsabile di un allarmante 80%-90% di cecità correlata all'AMD. Le attuali terapie anti-VEGF mostrano risposte subottimali in circa il 50% dei pazienti. La resistenza al trattamento anti-VEGF nei pazienti con CNV è spesso associata alla CNV arteriolare, mentre i responder tendono ad avere CNV capillare. Sebbene l'angiografia con fluoresceina (FA) sia comunemente utilizzata per valutare i modelli di perdita nei pazienti con AMD umida e nei modelli animali, non fornisce informazioni sulla morfologia vascolare della CNV (CNV arteriolare vs. CNV capillare). Questo protocollo introduce l'uso dell'angiografia con verde indocianina (ICGA) per caratterizzare i tipi di lesione in modelli murini di CNV indotti da laser. Questo metodo è fondamentale per studiare i meccanismi e le strategie di trattamento per la resistenza anti-VEGF nell'AMD umida. Si raccomanda di incorporare l'ICGA insieme alla FA per una valutazione completa delle caratteristiche sia della perdita che delle caratteristiche vascolari della CNV negli studi meccanicistici e terapeutici.
Introduzione
La degenerazione maculare legata all'età (AMD) è una condizione prevalente che porta a una grave perdita della vista negli individui anziani1. Solo negli Stati Uniti, si prevede che il numero di pazienti affetti da AMD raddoppierà, raggiungendo quasi 22 milioni entro il 2050, rispetto agli attuali 11 milioni. A livello globale, si prevede che il numero stimato di casi di AMD raggiungerà l'incredibile cifra di 288 milioni entro il 20402.
La neovascolarizzazione coroideale (CNV), nota anche come AMD "umida" o neovascolare, può avere effetti devastanti sulla vista a causa della formazione di vasi....
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Protocollo
Gli esperimenti sugli animali condotti in questo studio hanno ricevuto l'approvazione da parte dei comitati istituzionali per la cura e l'uso degli animali (IACUC) presso il Baylor College of Medicine. Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con le linee guida delineate nella Dichiarazione dell'Associazione per la Ricerca sulla Visione e l'Oftalmologia (ARVO) per l'Uso degli Animali nella Ricerca Oftalmica e sulla Visione. Per il presente studio sono stati utilizzati topi maschi e femmine C57BL/6J giovani (7-9 settimane) e vecchi (12-16 mesi). Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali).
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Risultati
Seguendo il protocollo, ICGA e FA sono stati eseguiti su CNV indotta da laser in topi C57BL/6J giovani (7-9 settimane) e vecchi (12-16 mesi). La FA fornisce informazioni sulla localizzazione e la fuoriuscita delle lesioni CNV (Figura 1, pannelli di sinistra), mentre l'ICGA rivela la morfologia vascolare delle lesioni CNV (Figura 1, pannelli di destra). Nei topi giovani, la CNV capillare domina le lesioni della CNV. Al contrario, i topi anziani mostrano CNV arter.......
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Discussione
Questo studio ha dimostrato l'uso dell'angiografia con verde indocianina (ICGA) per identificare la morfologia vascolare della neovascolarizzazione coroideale arteriolare e capillare (CNV) in modelli murini con CNV indotta da laser. Le proprietà legate all'emoglobina e alla luce infrarossa del colorante verde indocianina (ICG) hanno permesso di rilevare la morfologia della CNV, che è difficile da ottenere utilizzando l'angiografia con fluoresceina (FA), l'attuale metodo impiegato dalla comunità di ricerca.
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della BrightFocus Foundation, della Retina Research Foundation, della Mullen Foundation e del Sarah Campbell Blaffer Endowment in Ophthalmology to YF, dalla sovvenzione di base NIH 2P30EY002520 al Baylor College of Medicine e da una sovvenzione illimitata al Dipartimento di Oftalmologia del Baylor College of Medicine da Research to Prevent Blindness.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringa da insulina da 32 g | MHC Medical Products | NDC 08496-3015-01 | |
| Alexa Fluor 488 capra anticorpo secondario anti-coniglio | Invitrogen | A11008 | |
| Anti-alfa; muscolo liscio Anticorpo actina | Abcam | ab5694 | |
| Albumina sierica bovina | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-2323 | |
| Topi C57BL/6J (7-9 settimane) | The Jackson Laboratory | Strain #:000664 | |
| Fluoresceina Sale di sodio | Sigma-Aldrich | MFCD00167039 | |
| Gaymar T Pump Heat Therapy System | Gaymar | TP-500 | Pompa di calore a circolazione d'acqua per il recupero del topo dopo l'imaging |
| GenTeal Gel | Genteal | NDC 58768-791-15 | Gel |
| oculare lubrificante trasparenteGS-IB4 Alexa-Farina 568 coniugato | Invitrogen | I21412 | |
| Heidelberg Eye Explorerer | Heidelberg Engineering, Germania | HEYEX2 | |
| Verde indocianina | Pfaultz & Bauer | I01250 | |
| Ketamina | Vedco Inc. | NDC 50989-996-06 | |
| Paraformaldeide | Acros Organics | ||
| Soluzione oftalmica di proparacaina cloridrato (0,5%) | Sandoz | NDC 61314-016-01 | |
| Sistema di imaging multimodale Spectralis | Heidelberg Engineering, Germania | SPECTRALIS HRA+OCT | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100-1L | |
| Soluzione oftalmica tropicale (1%) | Bausch & Lomb | NDC 24208-585-64 | Per la dilatazione delle pupille |
| Xilazina | Lloyd Laboratories | NADA 139-236 |
Riferimenti
- Fleckenstein, M., et al. Age-related macular degeneration. Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).
- Wong, W. L., et al. Global prevalence of age-related macular degeneration and diseas....
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Ristampe e permessi
