Corticale dinamiche di flusso di sangue possono essere studiati in vivo attraverso l'immagine fluorescente coloranti destrano iniettato nella vena della coda di roditori con 2-fotone microscopia. Questo video mostra come la dinamica del flusso ematico immagine in neocorteccia di topi attraverso un vetro coperto di preparazione finestra cranica.
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Articolo metodologico
Un metodo per 2-Photon Imaging del flusso sanguigno nella neocorteccia attraverso una finestra del cranio
In questo articolo
Sommario
Abstract
La possibilità di immagine del sistema vascolare cerebrale (da grandi recipienti di capillari) e registrare la dinamica del flusso sanguigno nel cervello dei roditori che vivono intatto è una tecnica potente. Utilizzando in vivo 2-fotone microscopia attraverso una finestra del cranio è possibile coloranti fluorescenti immagine iniettato per via endovenosa. Questo permette uno per l'immagine della vascolarizzazione corticale e anche per ottenere misurazioni del flusso sanguigno. Questa tecnica è stata originariamente sviluppata da David Kleinfeld e Winfried Denk. Il metodo può essere utilizzato per studiare la dinamica del flusso di sangue durante o dopo l'ischemia cerebrale, nei disordini neurodegenerative, in tumori cerebrali, o in fisiologia cerebrale normale. Per esempio, è stato utilizzato per studiare come ictus provoca cambiamenti nella direzione del flusso sanguigno e cambiamenti nella velocità dei globuli rossi o di flusso all'interno e intorno l'infarto. Qui mostriamo come utilizzare 2-fotone microscopia a dinamiche immagine del flusso sanguigno nella corteccia di topi vivi con coloranti fluorescenti iniettato nella vena della coda.
Protocollo
Vena iniezioni coda di coloranti fluorescenti destrani
- Al fine di vascolarizzazione cerebrale immagine, gli animali devono essere iniettato per via endovenosa con un colorante fluorescente. Noi usiamo destrano coniugato coloranti perché la frazione destrano impedisce la tintura di attraversare la barriera ematoencefalica e la fuoriuscita dei vasi sanguigni.
- I topi vengono anestetizzati con isoflurano (4% per l'induzione, 1,5-2% durante l'iniezione).
- Coda è disinfettata con alcool al 70%.
- Con un ago 26 gauge, 75-100 ml di un 5% v / v soluzione di rodamina destrano sciolto in soluzione salina viene iniettata attraverso la....
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Discussione
Corticale dinamiche di flusso di sangue possono essere studiati in vivo attraverso l'immagine fluorescente coloranti destrano iniettato nella vena della coda di roditori con la microscopia a due fotoni. Questo video ha mostrato un metodo per come la dinamica del flusso ematico immagine in neocorteccia di topi attraverso un vetro coperto di preparazione finestra cranica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Destrano isotiocianato di fluoresceina | Reagente | Sigma-Aldrich | FD500S | peso mol 500.000 |
| Destrano isotiocianato di rodamina B | Reagente | Sigma-Aldrich | R9379 | peso mol ~70.000 |
Riferimenti
- Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Nat Acad Sci. 95, 15741-15746 (1998).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K.
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Ristampe e permessi
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