Questo è un protocollo che descrive come isolare e colture primarie di neuroni simpatici gangli cervicale superiore (SCG) di cuccioli di ratto appena nati.
Articolo metodologico
Questo è un protocollo che descrive come isolare e colture primarie di neuroni simpatici gangli cervicale superiore (SCG) di cuccioli di ratto appena nati.
I gangli cervicale superiore (SCG) nei ratti sono piccole, lucide, a mandorla strutture che contengono neuroni simpatici. Questi neuroni fornire innervazioni simpatico per la testa e del collo e costituiscono una popolazione ben caratterizzato e relativamente omogenea (4). Neuroni simpatici dipendono dal fattore di crescita nervosa (NGF) per la crescita sopravvivenza, differenziazione e assonale e la diffusa disponibilità di NGF facilita la loro cultura e la manipolazione sperimentale (2, 3, 6). Per queste ragioni, colture di neuroni simpatici sono stati utilizzati in una vasta gamma di studi tra cui lo sviluppo neuronale e la differenziazione, i meccanismi della morte cellulare programmata e patologiche, e trasduzione del segnale (1, 2, 5 e 6). Sezionare la SCG di ratto appena nati e dei neuroni simpatici coltura non è molto complicata e può essere imparato abbastanza rapidamente. In questo articolo, descriveremo in dettaglio come sezionare la SCG da cuccioli di ratto appena nati e di utilizzarle per stabilire le culture di neuroni simpatici. L'articolo si descrivono anche le fasi preparatorie e reagenti vari e le attrezzature che sono necessarie per raggiungere questo obiettivo.
1. Preparazione per la dissezione:
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Noi usiamo ratti Sprague Dawley per le nostre culture.
Prendetevi il tempo e attenzione durante la pulizia dei gangli. Rimuovere tutti, detriti vasi sanguigni e grasso. Questo passo è importante per garantire una cultura che è più o meno omogeneo e privo di tipi di cellule estranee. L'aggiunta di uridine/5-FDU in gran parte eliminare eventuali cellule rimanenti non neuronali (mitosi) che contaminano la cultura, o almeno sopprimere la proliferazione.
Inoltre, durante la fase di dissociazione, di pazienza e il tempo di sep.......
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Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
NZ ringrazia laboratorio membri Subhas Biswas, Andrew Sproul, e Ryan Willet per la formazione lei in dissezione e la raccolta neuroni simpatici. Supportato anche da finanziamenti del NIH-NINDS.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Pinzette, acciaio inossidabile #5 | Strumento | Roboz Surgical Instruments Co. | RS4976 | |
| Forbici, DEAVER dritte con lame affilate-smussate da 43 mm - 5,5 | Strumento | Roboz Surgical Instruments Co. | RS6760 | |
| RPMI 1640 con L-Glutamina | Reagente | Cellgro | 10-040-CV | |
| Siero fetale bovino | Reagente | SAFC Global | 12103c | |
| Siero equino da donatore | Reagente | JRH Biosciences | 12449 | Inattivare termicamente incubando in bagnomaria a 56°C per 30 minuti. |
| Penicillina/streptomicina | Reagente | GIBCO, by Life Technologies | 15140-122 | |
| Tripsina senza EDTA | Reagente | Difco Laboratories | MT 25-050-CI | |
| Uridina | Reagente | Sigma-Aldrich | U3003 | |
| 5-Fluoro-5’ deossiuridina | Reagente | Sigma-Aldrich | F-8791 | |
| NGF | Reagente | Harlan Laboratories | BT-5025 | |
| Microscopio per dissezione e sorgente luminosa | Microscopio | |||
| Provette in polipropilene da 15 ml | Strumento | BD Biosciences | 352096 | |
| Piastre per colture cellulari | Strumento | Corning |
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