Name: Modello murino di ischemia degli arti posteriori (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 51 s
Description: Impara a indurre l'ischemia unilaterale degli arti posteriori nei topi mediante legatura dell'arteria femorale e conferma con imaging Doppler laser. Questo modello chirurgico è fondamentale per studiare la malattia arteriosa periferica e la rigenerazione vascolare.

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Gli autori ringraziano Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, e lo Small Animal Imaging Stanford Nucleo per l&#39;assistenza tecnica. Gli autori hanno anche ringraziare AM Bickford, Inc. per il supporto di attrezzature veterinarie. Questa ricerca è stata sostenuta da borse di ricerca dal National Institutes of Health (R01 HL-75774, CA098303 R01, R21 HL085743, 1K12 HL087746), il tabacco California sul programma di ricerca sulle malattie della University of California (15IT-0257 e 1514RT-0169) , e l&#39;Istituto di Medicina Rigenerativa della California (RS1-00183). NH è sostenuto da una borsa di studio della American Heart Association.

1. Induzione di ischemia degli arti posteriori unilaterali <ol><li> Gli strumenti chirurgici necessari per questa operazione sono: belle pinze a punta, pinze a punta, forbici primavera, forbici chirurgiche, porta aghi, e divaricatore. Noi facciamo il nostro retrattore usando una graffetta, perché è più piccolo di divaricatori disponibili in commercio. Sterilizzare questi strumenti prima di un intervento da parte di un autoclave o di un hot-tallone sterilizzatore. Uno strumento di cauterizzazione e sterile, tamponi di cotone fatto bene sarà anche necessaria per questo tipo di chirurgia. Si raccomanda che gli strumenti essere ri-sterilizzati alle punte, se necessario durante la procedura. </li><li> Quando gli strumenti sono pronti, posizionare il mouse nella camera di induzione dell&#39;anestesia contenente 1-3% isoflurano in ossigeno al 100% con un flusso di 1L/min. </li><li> Lascia il mouse nella camera di induzione fino a che non non risponde agli stimoli esterni. Quindi rimuovere l&#39;animale dalla camera di induzione. Si consiglia di lavare l&#39;anestetico dalla finestra prima di aprire il coperchio, per ridurre l&#39;esposizione dell&#39;operatore isoflurano. </li><li> Poi posto l&#39;animale in posizione supina sul tavolo pre-operativi e collegarlo a un flusso continuo di isoflurano. Utilizzando un rasoio elettrico, togliere i capelli dalla arti posteriori. Applicare la crema di rimozione dei capelli per rimuovere completamente i capelli. </li><li> Posizionare il mouse in posizione supina su un pad riscaldato drappeggiato sul tavolo operatorio, e collegarlo a un flusso continuo di isoflurano. Estendere e proteggere le arti posteriori con un pezzo di nastro adesivo. Una volta che l&#39;arti posteriori è sicuro, pulire la pelle con tre scrub alternati Betadine e alcol. Per il resto della procedura chirurgica, l&#39;uso di un microscopio a dissezione 10X o 20X di ingrandimento di ottenere una visione allargata della regione degli arti posteriori. </li><li> Utilizzando una pinza sottile e forbici chirurgiche, fare un&#39;incisione della pelle, circa 1 cm di lunghezza, dal ginocchio verso la coscia mediale. </li><li> Utilizzando tampone fosfato (PBS)-tamponi di cotone inumiditi multa a punta, delicatamente spazzare via tessuto adiposo sottocutaneo che circondano il muscolo della coscia. </li><li> Successivamente, applicare il cauterio trasversalmente a incidere e sezionare attraverso il tessuto grasso sottocutaneo per rivelare l&#39;arteria femorale sottostante. </li><li> Utilizzare un divaricatore per aprire la ferita e per ottenere una migliore visione del sistema vascolare delle estremità inferiori. </li><li> Utilizzando una pinza sottile e un batuffolo di cotone sottile a punta, delicatamente trafiggerà la guaina membranosa femorale per esporre il fascio neurovascolare. </li><li> Poi, utilizzando una serie pulita di una pinza sottile e tampone di cotone, sezionare e separare l&#39;arteria femorale dalla vena femorale e al nervo posizione prossimale vicino all&#39;inguine. Dopo la dissezione, passare un filo di sutura di seta sotto 7-0 alla fine prossimale dell&#39;arteria femorale. Occludere l&#39;arteria femorale prossimale con doppi nodi. Posizionare la cravatta sulla nave come prossimale nella ferita il più possibile in modo da lasciare lunghezza per il pareggio secondo e un segmento di intervento che verranno recisi. </li><li> Separare l&#39;arteria femorale dalla vena femorale nella posizione distale vicino al ginocchio. Passare un filo di sutura sotto 7-0 alla fine distale dell&#39;arteria femorale prossimale all&#39;arteria poplitea. Occludere il vaso con doppi nodi. </li><li> Occludere l&#39;arteria femorale distale con una seconda serie di doppi nodi appena prossimale alla prima serie di nodi. Questa seconda serie di punti di sutura saranno utilizzati per la presa l&#39;arteria durante la procedura di transazione. </li><li> Allo stesso modo, per scopi di presa, occludere l&#39;arteria femorale prossimale con una seconda serie di doppi nodi appena distale rispetto alla prima serie di nodi. </li><li> Transetto il segmento di arteria femorale tra i nodi distali e prossimali con un tampone di cotone sottile a punta e un paio di forbici primavera. Fare attenzione a non forare la parete della vena femorale. </li><li> Rimuovere il riavvolgitore e chiudere l&#39;incisione con 5-0 punti di sutura Vicryl. Questi punti di sutura non devono essere rimosse in un secondo momento, come si dissolvono da soli. </li><li> Una volta che l&#39;incisione è chiuso, l&#39;animale posto in cima ad un pad riscaldato drappeggiata nella gabbia di recupero e monitorare continuamente fino a quando sveglio. </li><li> Dopo animale ha recuperato per 1 ora, procedere con il passaggio del sangue perfusione laser Doppler per confermare l&#39;induzione di ischemia. </li></ol> 2. Laser Doppler sangue perfusione <ol><li> Per iniziare la perfusione laser Doppler passo, posizionare il mouse nella camera di induzione dell&#39;anestesia contenente 1-3% isoflurano in ossigeno al 100% con un flusso di 1L/min. </li><li> Lascia il mouse nella camera di induzione fino a che non non risponde agli stimoli esterni. Quindi rimuovere l&#39;animale dalla camera di induzione. Si consiglia di lavare l&#39;anestetico dalla finestra prima di aprire il coperchio, per ridurre l&#39;esposizione dell&#39;operatore isoflurano. </li><li> Posto l&#39;animale sul pre-tavolo operatorio collegato al flusso continuo di isoflurano. Quindi rimuovere il pelo dal arti posteriori con un rasoio elettrico seguito da crema di rimozione dei capelli, se necessario. </li><li> Dopo aver rimosso i capelli,posto l&#39;animale su una superficie di 37 ° C riscaldata per 5 minuti sotto flusso continuo di isoflurano. Monitorare la temperatura interna per assicurare euthermia, come sbalzi di temperatura sarà notevolmente influenzare la perfusione. </li><li> Dopo 5 minuti, mettere l&#39;animale in posizione supina su una base non-riflettenti che assorbono la luce di superficie come colore verde panno, collegato ad un flusso continuo di isoflurano. Estendere l&#39;arti posteriori. </li><li> Successivamente, accendere il laser Doppler imager e il software di acquisizione e inizializzare il software. Specificare la dimensione del campo visivo e la risoluzione. E &#39;meglio tenere il campo visivo e la densità dei pixel coerenti tra gli animali in modo da rendere più facile l&#39;analisi future. </li><li> Aprire un nuovo file. Premere start per iniziare l&#39;acquisizione dei dati immagine. In generale, l&#39;imager rileva automaticamente la distanza del mouse, ma se richiesto, specificare la distanza degli animali per l&#39;imager. Il laser mostra i confini del campo di vista e quindi iniziare l&#39;acquisizione dati. </li><li> Dopo l&#39;acquisizione è stata completata, l&#39;immagine inizia a mostrare una gamma di colori che sono indicative del livello di perfusione di sangue alle gambe. I colori possono essere impostati per una vasta perfusione specifica per confrontare meglio i dati tra gli animali. </li><li> Quando l&#39;acquisizione dei dati è completa, salvare il file. </li><li> Poi rispedire l&#39;animale verso la gabbia di recupero e monitorare continuamente fino a quando l&#39;animale sveglio. </li><li> Per analizzare i dati, utilizzare la regolazione della soglia del software di analisi per sottrarre qualsiasi rumore di fondo. Una soglia di 0,2 di solito è un valore ragionevole. Selezionare 2 regioni di interesse, o ROI, che coprono ogni area degli arti posteriori. Una varietà di punti di riferimento possono essere utilizzate per standardizzare il ROI tra le arti e gli animali. Quindi determinare la perfusione media e variabilità del ROI. La differenza e il rapporto perfusione perfusione tra l&#39;arto ischemico e degli arti di controllo può essere facilmente determinato. </li><li> Questa procedura può essere ripetuta per seguire i cambiamenti della perfusione degli arti posteriori nel tempo. Ad un certo punto di tempo desiderato, l&#39;animale può essere eutanasia per la valutazione della funzione di tessuti e di confronto per i dati delle immagini di perfusione. </li></ol> 3. Rappresentante dei risultati: L&#39;anatomia della vascolarizzazione degli arti posteriori è illustrato nella figura 1 2. Un diagramma rappresentante della arti posteriori dopo espianto arteria femorale è illustrato nella figura 2. Per confermare l&#39;induzione di ischemia agli arti posteriori, l&#39;analisi della perfusione laser Doppler immagine mostra una drastica riduzione del flusso di sangue per l&#39;arto ischemico, rispetto al controllo degli arti, come mostrato nella Figura 3. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="Figura 1" width="600" height="406" /> Figura 1. Anatomia della vascolarizzazione degli arti posteriori. Asterischi indicano le posizioni dei legatura per l&#39;induzione di ischemia degli arti posteriori. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="Immagine 2" width="600" height="450" /> Figura 2. Diagramma rappresentante che mostra l&#39;anatomia delle arti posteriori dopo la legatura dell&#39;arteria femorale nei siti prossimale e distale dopo la rimozione l&#39;arteria femorale. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="Figura 3" width="600" height="256" /> Figura 3. Laser Doppler immagini che mostrano il flusso di sangue prima e dopo l&#39;induzione di ischemia agli arti posteriori sinistra (indicato dalla freccia).

<ol><li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCook%2C+MJ+%22The+anatomy+of+the+laboratory+mouse%22">The anatomy of the laboratory mouse</a>. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
</ol>

Ci sono alcune fonti di variabilità di prendere in considerazione durante la pianificazione e l&#39;esecuzione di modelli di ischemia degli arti posteriori. In primo luogo, il livello di ischemia può variare a seconda della posizione della legatura rispetto a quella dei rami laterali. Pertanto, per coerenza del modello, gli animali devono subire lo stesso livello di legatura arteriosa. Un&#39;altra fonte di variabilità nel recupero ischemico è legato alla età degli animali, con gli animali giovani (6-8 settimane) con i tassi di recupero più veloce e più completa di animali più vecchi (8-10 mesi), valutata in base emodinamica (cioè laser Doppler perfusione) o funzionale (cioè di test tapis roulant) misure. Per gli studi in cui si sta valutando un agente angiogenico, può essere preferibile utilizzare animali più vecchi, perché la differenza maggiore tra i gruppi possono essere osservati con un intervento terapeutico. Al contrario, per gli studi in cui si sta valutando un anti-angiogenico fattore, può essere preferibile utilizzare animali più giovani per massimizzare la misura 3 effetto. Se eseguito correttamente, ci dovrebbe essere complicazioni minime come sanguinamento, infezione, o la mortalità. Se l&#39;emorragia si verifica dalla rottura accidentale della vena femorale o di altre navi, la pressione moderata con un applicatore con punta di cotone sterile o garza deve essere applicato al sito di emorragia fino a quando l&#39;emorragia si ferma. Gli animali che presentano segni di infezione devono essere trattati con agenti anti-infettivi. Animali espositrici cancrena significativo potrebbe essere necessario beeuthanized. Questa complicanza è più comune negli animali più vecchi, e in alcuni ceppi, come topi BALB c 4. Inoltre, il modello di ischemia degli arti posteriori possono causare dolore da lieve a moderata. Pertanto, gli analgesici come la buprenorfina o carprofene deve essere somministrato come necessari per il trattamento del dolore, secondo le raccomandazioni del IACUC. In conclusione, abbiamo dimostrato un metodo semplice e riproducibile per lo studio PAD in un modello murino di ischemia degli arti posteriori. Il modello di ischemia degli arti posteriori con l&#39;analisi laser Doppler è un sistema eccellente per studiare patologie vascolari e per la valutazione dei candidati terapeutici.

<table><tbody><tr><td>Strumenti chirurgici</td><td>Strumento</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di cotone Constix</td><td>Strumento</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Betadine (povidone-iodio)</td><td>Reagente</td><td>PDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcol al 70%</td><td>Reagente</td><td>Kendall</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tampone al fosfato</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto di seta 7-0</td><td>Strumento</td><td>Genzyme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto vicryl 5-0</td><td>Strumento</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rasoio elettrico</td><td>Strumento</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Caustico</td><td>Strumento</td><td>Baxter International Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema Laser Doppler e PeriScan PIM 3</td><td>Attrezzatura</td><td>Perimed</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modello murino di ischemia degli arti posteriori

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

Negli Stati Uniti, malattia arteriosa periferica (PAD) colpisce circa 10 milioni di persone, ed è anche diffusa in tutto il mondo. Terapie mediche per alleviare la sintomatologia sono limitati. Interventi chirurgici o endovascolari sono utili per alcuni individui, ma a lungo termine i risultati sono spesso deludenti. Di conseguenza, vi è la necessità per lo sviluppo di nuove terapie per il trattamento di PAD. Il murini preparazione ischemia degli arti posteriori è un modello di PAD, ed è utile per testare nuove terapie. Rispetto ad altri modelli di ischemia tissutale, come la legatura dell&#39;arteria coronarica o cerebrale, la legatura dell&#39;arteria femorale prevede un modello più semplice del tessuto ischemico. Altri vantaggi di questo modello sono la facilità di accesso all&#39;arteria femorale e tasso di mortalità bassa. In questo video, dimostriamo la metodologia per il modello murino di ischemia hindimb unilaterale. I materiali e procedure specifiche per la creazione e la valutazione del modello sarà descritto, compresa la valutazione della perfusione con laser Doppler. Questo protocollo può essere utilizzato anche per il trapianto e non invasivo il monitoraggio delle cellule, che è dimostrato da Huang et al. 1.

La procedura chirurgica per l&#39;induzione di ischemia degli arti posteriori unilaterale è dimostrato, con la conferma di ischemia da imaging laser Doppler perfusione.

Modello murino di ischemia degli arti posteriori

Negli Stati Uniti, la malattia arteriosa periferica (PAD) colpisce circa 10 milioni di individui ed è diffusa anche a livello mondiale. Le terapie mediche per...

Negli Stati Uniti, la malattia arteriosa periferica, PAD, colpisce circa 10 milioni di individui, in particolare fumatori, diabetici e persone di età superiore ai 70 anni. L'obiettivo generale di questo intervento chirurgico è indurre ischemia dell'arto posteriore legando i segmenti prossimale e distale dell'arteria femorale. La procedura inizia anestetizzando, rasando e posizionando il topo sul tavolo operatorio in posizione supina.Quindi si esegue un'incisione della cute a partire dal ginocchio verso la coscia mediale, esponendo l'arteria femorale sottostante. Successivamente, l'arteria femorale viene accuratamente separata dalla vena femorale. Vengono effettuati doppi nodi sia nel sito di legatura distale che in quello prossimale.Il segmento dell'arteria femorale viene quindi escisso. Il sito dell'incisione viene chiuso mediante punti di sutura e l'animale viene lasciato riprendere dall'anestesia. Per confermare l'induzione dell'ischemia dell'arto posteriore, il topo anestetizzato viene posizionato in posizione supina.Successivamente, entrambi gli arti inferiori vengono scansionati mediante il laser doppler. L'immagine viene quindi salvata e valutata per la perfusione. Ciao, sono John Cook.Sono professore di medicina nella divisione di medicina cardiovascolare presso la Stanford University. Il nostro laboratorio si occupa di angiogenesi e rigenerazione vascolare. In questo video, due dei miei ricercatori postdottorato, la dottoressa Nan Wong e Hir Niyama, vi presenteranno il modello di ischemia dell'arto posteriore del topo, un modello importante per lo studio della malattia arteriosa periferica e comunemente utilizzato nel nostro laboratorio per valutare gli effetti dei fattori di crescita e della terapia cellulare sull'angiogenesi.Utilizziamo questi procedimenti nel nostro laboratorio per studiare l'effetto delle cellule endoteliali derivate da cellule staminali sulla riparazione vascolare. Cominciamo dunque. Gli strumenti chirurgici necessari per questo intervento includono pinze fini a punta, pinze a punta, forbici a molla, forbici chirurgiche, pinza portaago e retrattore.Realizziamo il nostro retraore utilizzando una graffetta poiché è più piccolo rispetto a quelli disponibili in commercio. I retrautori devono sterilizzare questi strumenti prima dell'intervento chirurgico con un sterilizzatore a perle calde; inoltre, saranno necessari uno strumento diatermico e bastoncini di ovatta sterili con punta fine. Quando gli strumenti sono pronti, posizionare il topo nella camera di induzione dell'anestesia contenente da 1 a 3% di isoflurano in ossigeno al 100% con un flusso di un litro al minuto.Lasciare il topo nella camera di induzione fino a quando non reagisce a stimoli esterni. Successivamente, rimuovere l'animale dalla camera di induzione. Quindi posizionare l'animale in posizione supina sul tavolo pre-operatorio e collegarlo a un flusso continuo di isoflurano.Utilizzando un rasoio elettrico, rimuovere i peli dall'arto posteriore. Applicare una crema depilatoria per rimuovere completamente i peli. Dopo aver rasato il topo, estendere e fissare l'arto posteriore con un pezzo di nastro adesivo.Una volta assicurata la zampa posteriore, detergere la cute con tre passaggi alternati di Betadine e alcol. Utilizzando pinzette fini e forbici chirurgiche, praticare un'incisione della cute lunga circa un centimetro, dal ginocchio verso la coscia mediale, usando soluzione salina tamponata al fosfato. Inumidire con PBS e utilizzare bastoncini di cotone a punta definita.Rimuovere delicatamente il tessuto adiposo sottocutaneo che circonda il muscolo della coscia. Successivamente, applicare il bisturi elettrico trasversalmente a piccole porzioni e dissezionare attraverso il tessuto adiposo sottocutaneo per evidenziare l'arteria femorale sottostante. Poi, utilizzare un retrattore per aprire la ferita e ottenere una migliore visione della vascolarizzazione dell'arto inferiore.Utilizzando pinzette fini e un bastoncino di ovatta a punta sottile, perforare delicatamente la guaina femorale membranosa per esporre il fascio neurovascolare. Successivamente, utilizzando un nuovo paio di pinzette fini e un bastoncino di ovatta pulito, dissezionare e separare l'arteria femorale dalla vena e dal nervo femorale nella posizione prossimale vicino all'inguine. Dopo la dissezione, passare un filo di seta da sette oh sotto l'estremità prossimale dell'arteria femorale.Occludere l'arteria femorale prossimale utilizzando due nodi doppi. Posizionare il legaccio sul vaso il più prossimale possibile nella ferita, in modo da lasciare abbastanza lunghezza per il secondo legaccio e un segmento intermedio che verrà sezionato. Separare l'arteria femorale dalla vena femorale nella sede distale, vicino al ginocchio.Fare passare un filo di sutura 7-0 sotto l'estremit&agrave; distale dell'arteria femorale, in posizione prossimale rispetto all'arteria poplitea. Occludere il vaso mediante nodi doppi. Occludere l'arteria femorale distale con un secondo paio di nodi doppi, appena prossimali al primo gruppo di nodi.Questo secondo insieme di punti sarà utilizzato per afferrare l'arteria durante la procedura di sezione. Analogamente, a scopo di presa, occludere l'arteria femorale prossimale con il secondo insieme di nodi doppi appena distale rispetto al primo insieme di nodi. Sezionare il segmento dell'arteria femorale compreso tra i nodi distale e prossimale utilizzando un bastoncino di ovatta a punta fine e un paio di forbici a molla.Procedere con cautela per non perforare la parete della vena femorale. Rimuovere il retraattore e chiudere l'incisione utilizzando suture di seta da cinque-oh. Una volta chiusa l'incisione, restituire l'animale alla gabbia di recupero e monitorarlo fino al risveglio. Dopo che l'animale si è ripreso per un'ora, procedere con la perfusione ematica Doppler a laser.Passo per confermare l'induzione di ischemia. Per iniziare la perfusione con laser doppler, posizionare il topo nella camera di induzione dell'anestesia contenente da uno a 3% di isoflurano in ossigeno al cento per cento con un flusso di un litro al minuto. Lasciare il topo nella camera di induzione fino a quando non risponde a stimoli esterni.Quindi rimuovere l'animale dalla camera di induzione e posizionarlo sul tavolo pre-operatorio collegato al flusso continuo di isoflurano. Successivamente, rimuovere il pelo dall'arto posteriore utilizzando un rasoio elettrico, seguito, se necessario, da una crema depilatoria. Dopo la rimozione del pelo, posizionare l'animale su una superficie riscaldata a 37 gradi Celsius per cinque minuti, mantenendo il flusso continuo di isoflurano.Dopo cinque minuti, posizionare l'animale in posizione supina su una superficie assorbente non riflettente, come un tessuto di colore verde collegato a un flusso continuo di iso fluorine. Estendere gli arti inferiori. Successivamente, accendere l'imager a effetto Doppler laser e il software di acquisizione, quindi inizializzare il software.Specifica le dimensioni del campo visivo e la risoluzione. È preferibile mantenere costanti il campo visivo e la densità dei pixel tra gli animali. Per facilitare le analisi future, apri un nuovo file.Premere start per iniziare l'acquisizione dei dati dell'immagine. Quando richiesto, specificare la distanza dell'animale rispetto all'imager. Il laser mostrerà i bordi del campo visivo e quindi inizierà l'acquisizione dei dati.Al termine dell'acquisizione, nell'immagine comparirà una gamma di colori indicativa del livello di perfusione sanguigna alle zampe. I colori possono essere impostati su un intervallo di perfusione specifico. Per confrontare meglio i dati tra animali una volta completata l'acquisizione, salvare il file, quindi restituire l'animale alla gabbia di recupero e monitorarlo continuamente finché non si sveglia.Per analizzare i dati, utilizzare la regolazione della soglia nel software di analisi per sottrarre qualsiasi rumore di fondo. Una soglia di 0,2 è solitamente un valore ragionevole. Selezionare due aree di interesse o ROI che coprano ciascuna la regione dell'arto posteriore.Una varietà di punti di riferimento può essere utilizzata per standardizzare la regione di interesse (ROI) tra arti e animali, quindi determinare la perfusione media e la variabilità all'interno della ROI. La differenza di perfusione e il rapporto di perfusione tra l'arto ischemico e l'arto di controllo possono quindi essere facilmente determinati. Questa procedura può essere ripetuta per monitorare i cambiamenti nella perfusione dell'arto posteriore.Nel tempo, in un momento prestabilito, l'animale può essere sottoposto a eutanasia per la valutazione della funzione tissutale. In confronto ai dati di immagine della perfusione, qui viene mostrato un diagramma rappresentativo dell'arto posteriore dopo l'esposizione dell'arteria femorale. I punti di sutura indicano le posizioni dei siti di legatura prossimale e distale.Quando l'intervento viene eseguito con attenzione, il sanguinamento è minimo e l'intervento può essere completato in meno di un'ora. Ecco i risultati dell'analisi dell'immagine di perfusione con laser doppler. L'immagine a sinistra mostra la perfusione di entrambi gli arti prima dell'induzione ischemica.Mentre l'immagine a destra mostra l'abbondanza di entrambi gli arti, dopo che l'arto posteriore sinistro ha subito un'induzione ischemica. L'intensità del colore nell'immagine indica la quantità di flusso sanguigno.Rispetto all'arto di controllo, l'arto ischemico mostra un colore molto tenue, il che suggerisce una riduzione drastica del flusso sanguigno. Utilizzando questi dati, il software può quantificare la perfusione media nell'arto ischemico e in quello di controllo per determinare la differenza di perfusione e il rapporto di perfusione. Pertanto, questi risultati confermano l'induzione di ischemia all'arto posteriore.È stato appena mostrato come indurre un'ischemia unilaterale dell'arto posteriore nel modello murino e confermare l'induzione dell'ischemia mediante perfusione ematica a Doppler laser. Il modello di ischemia dell'arto posteriore con analisi mediante imaging a Doppler laser rappresenta un eccellente sistema per lo studio delle patologie vascolari e per la valutazione di potenziali terapie. A questa procedura può seguire il trapianto e il monitoraggio non invasivo delle cellule, come dimostrato in un altro video di jove di Huang et al.Quando si eseguono queste procedure, è importante ricordare di prestare attenzione a non perforare la parete della vena femorale durante l'escissione dell'arteria femorale con forbici a pressione. Utilizzare inoltre un sito di legatura simile per tutti gli animali nell'esperimento, al fine di garantire la coerenza del modello di ischemia grave. È tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Biology

Biologia

La mancanza di comprensione meccanicistica del midollo spinale ischemia-riperfusione ha impedito ulteriori aggiunte per evitare paraplegia seguenti operazioni aortica ad alto rischio. Pertanto, lo sviluppo di modelli animali è imperativo. Questo manoscritto dimostra riproducibile paralisi degli arti inferiori in seguito toracica occlusione aortica in un modello murino.

Riproducibile Paraplegia da Toracica aortica occlusione in un modello murino di Spinal Cord ischemia-riperfusione

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

L'induzione chirurgica dell'ischemia degli arti posteriori nel topo è utile per esaminare l'angiogenesi, tuttavia questa è compromessa in alcuni ceppi di topi consanguinei che mostrano una marcata necrosi tissutale indotta da ischemia. Vengono descritti metodi per indurre l'ischemia subacuta degli arti utilizzando costrittori ameroidi per aggirare questo problema attraverso l'induzione di un'occlusione arteriosa graduale.

Metodi di acuta e subacuta murino arti posteriori ischemia

Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

Descriviamo una procedura chirurgica utilizzata per indurre l'ischemia periferica nei conigli con iperlipidemia e diabete. Questo intervento chirurgico agisce come un modello preclinico per le condizioni sperimentate nella malattia dell'arteria periferica nei pazienti. L'angiografia è anche descritta come un mezzo per misurare l'entità dell'ischemia introdotta e il recupero della perfusione.

Modello preclinico di ischemia degli arti posteriori nei conigli diabetici

Qui viene presentato un modello sperimentale critico di ischemia dell'arto posteriore seguito da una batteria di test funzionali, istologici e molecolari per valutare l'efficacia delle terapie angiogeniche.

Valutazione dell'angiogenesi terapeutica in un modello Murine di Ischemia hindlimb

Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

Modello di infarto miocardico Murine utilizzando la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra

Questo articolo dimostra un approccio chirurgico efficiente per stabilire l'ischemia acuta nei topi con una piccola incisione. Questo approccio può essere applicato dalla maggior parte dei gruppi di ricerca senza aggiornamenti di laboratorio.

Un modello chirurgico modificato di ischemia dell'arto posteriore in ApoE-/- Topi utilizzando un'incisione in miniatura

Qui descriviamo un metodo semplice e riproducibile che può indurre infarto miocardico o danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Il presente protocollo descrive un modello unico e clinicamente rilevante di arteriopatia periferica che combina l'elettrocoagulazione dell'arteria femorale e venosa con la somministrazione di un inibitore dell'ossido nitrico sintasi per indurre la cancrena degli arti posteriori nei topi FVB. La perfusione intracardiaca di DiI viene quindi utilizzata per l'imaging tridimensionale ad alta risoluzione della vascolarizzazione del footpad.

Imaging tridimensionale ad alta risoluzione della vascolarizzazione del footpad in un modello di cancrena posteriore murina

Descriviamo come generare un modello chirurgico ampiamente utilizzato di danno da ischemia-riperfusione intestinale (IRI) nei roditori. La procedura prevede l'occlusione dell'arteria mesenterica superiore seguita dal ripristino del flusso sanguigno. Questo modello è utile per gli studi che indagano le cause occlusive dell'IRI intestinale sia in medicina veterinaria che umana.

Modello di roditore di danno da ischemia-riperfusione intestinale attraverso l'occlusione dell'arteria mesenterica superiore

Impara a indurre l'ischemia unilaterale degli arti posteriori nei topi mediante legatura dell'arteria femorale e conferma con imaging Doppler laser. Questo modello chirurgico è fondamentale per studiare la malattia arteriosa periferica e la rigenerazione vascolare.

Modello murino di ischemia degli arti posteriori

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