Name: Murino procedura trapianto renale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Impara la procedura di trapianto renale nel topo, un modello fondamentale per studiare la biologia dei trapianti. Questo metodo include il monitoraggio post-operatorio e la valutazione della funzione del graft tramite creatininemia.

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Questi studi sono stati sostenuti in parte da finanziamenti dal NIH R01 AI36532 a GAH. Vorremmo riconoscere il notevole supporto nel trapianto patologia fornito dal Dr. Tibor Nadasdy, e la guida preziosa e lungimiranza fornito dal compianto Dr. Charles G. Orosz nell&#39;avviare questo sforzo di ricerca.

Harvest donatore di organi (2): <ol><li> Anestetizzare il donatore utilizzando IP pentobarbital 65mg/kg; anestesia è gestito da isoflurano (2-3%). </li><li> Eseguire un&#39;incisione mediana da sterno al pube per entrare nel ventre donatore ed esporre il rene sinistro, spostando l&#39;intestino lateralmente sul lato destro. </li><li> Isolare il rene sinistro legando e dividendo i vasi surrenali e testicoli con una sutura di seta 8-0. </li><li> Mobilitare l&#39;aorta sopra l&#39;incrocio con l&#39;arteria e la vena renale. </li><li> Mobilitare la vena cava inferiore (IVC) sopra e sotto l&#39;incrocio con l&#39;arteria e la vena renale. </li><li> Legare l&#39;aorta sotto l&#39;arteria e la vena renale con una sutura 8-0 di seta per ridurre al minimo il sanguinamento. </li><li> Sezionare dell&#39;uretere sinistro dal ilo renale alla vescica. </li><li> Esporre il bivio ureterovesical con retrazione caudale sulla cupola della vescica. </li><li> Accise un piccolo cerotto ellittica della vescica contenente il bivio a sinistra ureterovesical, utilizzato per la ricostruzione della vescica urinaria attraverso un-a-anastomosi vescica. L&#39;uretere destro non è incluso con la vescica. </li><li> Legare la IVC sotto l&#39;arteria renale e la vena con una sutura di seta 8-0. </li><li> Legare l&#39;aorta sopra l&#39;arteria renale e vena, e lentamente profumato l&#39;innesto in situ con 0,2 0,4 ml freddo, eparinizzati soluzione di Ringer lattato attraverso l&#39;aorta sottorenale. </li><li> Legare la IVC sopra l&#39;arteria renale e la vena con una sutura di seta 8-0. </li><li> Transetto la vena renale al suo incrocio con la IVC. </li><li> Dividere l&#39;aorta obliquamente, a circa due millimetri sotto l&#39;arteria renale. </li><li> Rimuovere il rene e la sua vascolarizzazione con uretere allegato alla patch vescica in blocco. Conservare in soluzione di Ringer lattato sul ghiaccio. </li><li> Euthanize il mouse donatore di dislocazione cervicale in anestesia. </li></ol> Destinatario trapianto (2): <ol><li> Anestetizzare il destinatario con 65 mg / kg IP pentobarbital e mantenere l&#39;anestesia con isoflurano (2-3%). </li><li> Effettuare una incisione sulla linea mediana, coprire l&#39;intestino con una garza umida e con attenzione lo ritrae sul lato sinistro. </li><li> Legare l&#39;uretere destro, l&#39;arteria renale e vena, e rimuovere il rene destro. </li><li> Con attenzione isolare e cross-clamp l&#39;aorta sottorenale e IVC con due morsetti microvasular 4 mm dopo legando i rami lombare. </li><li> Posizionare un 10-0 sutura in nylon con uno spessore totale di aorta e ritrarre per fare un aortaotomy ellittica con un unico taglio (circa un quinto del diametro del vaso). </li><li> Fare un venotomy longitudinale perforando la IVC con un ago 30 gauge e di estendere opportunamente utilizzando microscissors. </li><li> Irrigare sia l&#39;aorta e IVC con soluzione salina eparinata per cancellare il sangue intraluminale o coaguli. </li><li> Rimuovere il rene del donatore dal ghiaccio e mettetelo intra-addominale nel fianco destro del mouse. Il rene del donatore è tenuto umido con una soluzione salina fredda imbevuta di tampone di garza. </li><li> Inserire due punti di sutura rimanere al vertice prossimale e distale del aortaotomy destinatari con il polsino aortico donatori. </li><li> Fai un end-to-side anastomosi tra il bracciale aortico donatore e la parete anteriore del aortaotomy destinatari, utilizzando 2 ~ 3 continua 10-0 suture in nylon nella parte esterna dell&#39;aorta. </li><li> Girare il trapianto di rene del donatore verso il fianco sinistro del destinatario. ripetere la procedura precedente tra il polsino aortico donatore e la parete posteriore della aortaotomy destinatari </li><li> Eseguire un end-to-side anastomosi tra la vena renale donatore e la parete posteriore della IVC destinatari, utilizzando 4-5 10-0 continuo suture in nylon all&#39;interno della IVC. e poi la parete anteriore della vena renale IVC e donatori sono chiusi con 4 ~ 5 punti di sutura continua al di fuori della IVC. </li><li> L&#39;anastomosi di entrambi vena e arteria deve essere completato entro 20 minuti. </li><li> Sciacquare l&#39;innesto con soluzione fisiologica fredda diverse volte durante l&#39;anastomosi. </li><li> Dividere la cupola della vescica destinatario, e fermare le emorragie con cauterizzazione. </li><li> Fai un piccolo taglio sulla cupola. </li><li> Inserire due suture di 10-0 in nylon per anastomize la piccola macchia vescica donatori con la cupola della vescica destinatari. Ogni lato di anastomosi viene suturata con 8 ~ 10 punti di sutura continua. </li><li> Chiudere l&#39;addome in due strati con continue 4-0 sterile, sutura sintetico assorbibile Vicryl. </li><li> Dare topi riceventi 0,4 ml soluzione salina calda durante l&#39;intervento chirurgico da intermittenti iniezione ev. </li></ol> Cure post-operatorie del destinatario <ol><li> Dopo aver chiuso dell&#39;addome, una singola iniezione intramuscolare di penicillina (500U/10g) è somministrato (2). </li><li> Inoltre, i destinatari ricevono 0,05 mg / kg di buprenorfina per via intramuscolare al giorno 0 e 1 ° giorno dopo l&#39;intervento chirurgico per il dolore. Dopo la chirurgia, trapianto di ricevere acqua contenente sulfatrim (100mg/kg) fino a quando l&#39;esperimento è terminated. </li><li> Per le prime 24 ore dopo l&#39;intervento topi sono conservati in un incubatore a temperatura controllata. </li><li> I topi di solito guariscono da anestesia entro 1 ora dell&#39;operazione e vengono dati cibo normale e acqua ad libitum. </li><li> Suture della pelle vengono rimossi 2 settimane dopo l&#39;intervento chirurgico. </li></ol> Destinatario nefrectomia <ol><li> Anestetizzare il destinatario 4 ~ 7 giorni dopo il trapianto di rene con 65 mg / kg IP pentobarbital, l&#39;anestesia è gestito da isoflurano (2-3%). </li><li> Aperto l&#39;addome attraverso una incisione sulla linea mediana. </li><li> Coprire l&#39;intestino con garza imbevuta di soluzione salina e con attenzione lo ritrae sul lato destro. </li><li> Rimuovere il rene sinistro dopo legatura sinistra uretere, la vena renale e arteria. </li><li> Chiudere l&#39;addome in due strati con continue 4-0 sutura sintetico assorbibile Vicryl. </li></ol> Sangue intero creatinina Misure <ol><li> Settimanale per la raccolta del sangue bisettimanale inferiore a 0,2 cc è effettuata sia submandibularly senza anestesia o retro-orbitalmente sotto anestesia isoflurano. </li><li> Quantitativa dei livelli di creatinina nel sangue intero sono determinati utilizzando un I-Stat Analyzer Clinica (Portable Heska Corp., Fort Collins, CO). </li><li> Unità convenzionali (mg / dl) sono convertiti in unità SI di micromol / L moltiplicando le unità convenzionali da 88,4. </li></ol>

<ol><li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term%2C+H-2+incompatible+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22JExpMed%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).</li>
<li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li>
</ol>

Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le linee guida e dei regolamenti previsti dalla Ohio State University IACUC.

Abbiamo effettuato circa 1200 casi di trapianto renale nei topi con una percentuale di successo tecnico del&gt; 90%. Rispetto al trapianto di cuore, il tasso di successo del trapianto di rene è solitamente basso. Tuttavia, il nostro laboratorio ha mantenuto un alto tasso di successo (&gt; 90%) del trapianto di rene. I punti chiave per il successo sono per ridurre le lesioni da riperfusione sia donatore di rene e dei destinatari, e ridurre al minimo il sanguinamento e trombosi durante tutta la procedura e post-operatoria...

<table><tbody><tr><td>i-STAT</td><td>Altro</td><td>HESKA</td><td>Cat 5101</td><td></td></tr><tr><td>Cartuccia i-STAT</td><td>Altro</td><td>HESKA</td><td>CAT 5110-CREA</td><td></td></tr><tr><td>Sulfatrim</td><td>Altro</td><td>Actavis</td><td>R02109</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Altro</td><td>NOVAPLUS</td><td>CA-0474</td><td></td></tr><tr><td>Sutura 10-0</td><td>Chirurgia</td><td>Sharpoint</td><td>AK0100</td><td></td></tr></tbody></table>

murino procedura trapianto renale

Murine Renal Transplantation Procedure

Trapianto renale ortotopico nei topi è una procedura tecnicamente difficile. Anche se il primo trapianto di rene nei topi sono stati eseguiti da Russell et al oltre 30 anni fa (1) e raffinata da Zhang et al anni dopo (2), poche persone al mondo hanno imparato questa procedura. Nel nostro laboratorio abbiamo eseguito con successo 1200 trapianti di rene ortotopico con tasso di sopravvivenza&gt; 90%. I punti chiave per il successo includono il controllo rigoroso del danno da riperfusione, sanguinamento e trombosi, sia durante la procedura e post-trapianto, e l&#39;uso di 10-0 11-0, invece di sutura per anastomosi. Cure post-operatorie e nel trattamento del destinatario è estremamente importante per il successo dei trapianti e della valutazione. Tutti i destinatari del trapianto di rene ricevere antibiotici sotto forma di un&#39;iniezione di penicillina immediatamente post-trapianto e sulfatrim nell&#39;acqua da bere in continuazione. Salute degli animali complessivo viene valutato quotidianamente e tutto analisi di creatinina nel sangue sono eseguiti di routine con un portatile I-STAT macchina per valutare la funzione del trapianto.

Trapianto renale nei topi è una procedura tecnicamente impegnativo, che richiede un&#39;attenta assistenza post-operatoria e terapia per il successo.

Murino procedura trapianto renale

Il trapianto renale ortotopico nel topo è una procedura tecnicamente impegnativa. Sebbene i primi trapianti di rene nel topo siano stati eseguiti da Russell...

La procedura di trapianto renale nel topo inizia con il prelievo dell'organo donatore, durante il quale il rene sinistro viene asportato dal topo donatore e conservato sul ghiaccio. Il rene destro viene rimosso dal topo ricevente per fare spazio al rene donatore. Il rene donatore viene quindi prelevato dal ghiaccio e trapiantato nel topo ricevente.Al topo è concesso un periodo di recupero di quattro giorni prima che il rene nativo residuo venga asportato. Dopo sette giorni, i livelli di creatinina vengono monitorati mediante un analizzatore clinico portatile I STAT per valutare la funzionalità del trapianto. Salve, sono Sarah Heimer del laboratorio del Dott. Greg Hadley e del Dipartimento di Chirurgia dei Trapianti della Ohio State University.Oggi vi mostreremo una procedura per il trapianto renale nel topo. L'intervento chirurgico di trapianto renale che vedrete oggi sarà eseguito dalla nostra esperta neurochirurgo residente Jing Wing. Utilizzate questa procedura nel nostro laboratorio per studiare gli eventi immunologici del rigetto del trapianto, nonché le strategie per prevenire il rigetto.Iniziamo. Per iniziare il prelievo dell'organo donatore, si esegue un test del pizzicotto per assicurarsi che l'animale sia completamente anestetizzato; operando in un campo sterile e utilizzando strumenti sterilizzati, si pratica un'incisione mediana nel topo anestetizzato dallo sterno fino al pube ed si espone il rene sinistro spostando l'intestino lateralmente sul lato destro al fine di eseguire la perfusione del rene donatore. Si posizionano suture di seta TY 4-0 intorno all'aorta e alla vena cava inferiore al di sotto e al di sopra dell'arteria e della vena renale.Perfuso lentamente in situ con soluzione di Ringer lattato eparinizzata fredda attraverso l'aorta infrarenale. Isolare il rene sinistro legando e sezionando i vasi surrenali e testicolari e alcuni rami lombari con un punto di seta 8-0. Successivamente, mobilizzare la giunzione tra l'aorta e la vena cava inferiore con l'arteria e la vena renale; posizionare quattro punti di seta 8-0 intorno all'aorta e alla vena cava inferiore al di sotto e al di sopra dell'arteria e della vena renale.Per ridurre al minimo l'emorragia, legare prima l'aorta al di sotto del vaso renale. Quindi dissezionare l'uretere sinistro dall'ilo renale fino alla vescica. Esporre l'uretere alla giunzione con la vescica utilizzando la retrazione della cupola vescicale.Assicurandosi di evitare l'uretere destro, escindere una piccola porzione ellittica della vescica contenente la giunzione vescico-ureterale sinistra. Questa porzione verrà utilizzata per la ricostruzione urinaria mediante un'anastomosi vescica-vescica. Quindi legare l'aorta al di sopra dell'arteria e della vena renale.Perfondere lentamente l'innesto in situ con soluzione di Ringer lattato eparinizzata fredda attraverso l'aorta infrarenale. Dividere l'aorta obliquamente a circa due millimetri al di sotto dell'arteria renale. Infine, rimuovere il rene e il suo apporto vascolare con l'uretere attaccato alla porzione di vescica sul blocco.Il rene deve essere conservato in soluzione di Ringer lattato su ghiaccio fino al momento del trapianto nell'ospite, quindi il topo donatore deve essere soppresso mediante dislocazione cervicale sotto anestesia. Come dimostrato in precedenza, il trapianto nel ricevente inizia con una pinzatura per verificare che l'animale sia completamente anestetizzato. Per iniziare l'intervento chirurgico, effettuare un'incisione mediana, coprire l'intestino con garza bagnata e retrarre con cura l'intestino sul lato sinistro.Per completare con successo questo trapianto renale, deve essere eseguita un'anastomosi tra la cuffia aortica del donatore e l'aorta del ricevente. La vena renale del donatore deve essere anastomizzata alla vena cava inferiore del ricevente e la toppa vescicale del donatore alla vescica del ricevente. L'arteria e la vena renale del rene destro e l'uretere.Rimuovere il rene dopo la legatura. Isolare con attenzione i rami lombari e clampare con due clip microvascolari da quattro millimetri l'aorta infrarenale e la vena cava inferiore. Inserire una sutura in nylon da 10 oh attraverso lo spessore completo dell'aorta e ritrarre per eseguire un'otomia aortica ellittica mediante un singolo taglio pari a circa un quinto del diametro del vaso.Successivamente, eseguire un'incisione longitudinale sulla vena cava inferiore perforandola con un ago da 30 gauge ed estendendola in modo appropriato mediante forbici microchirurgiche. Irrigare sia l'aorta che la vena cava inferiore con soluzione salina eparinizzata per rimuovere il sangue intraluminale o i coaguli. Rimuovere il rene donatore dal ghiaccio e posizionarlo nel fianco destro del topo.Posizionare due punti di sutura di sostegno all'apice prossimale e distale dell'otomia aortica del ricevente con il manicotto aortico del donatore. Eseguire un'anastomosi termino-laterale tra il manicotto aortico del donatore e la parete anteriore dell'otomia aortica del ricevente utilizzando da due a tre suture continue in nylon 10 oh all'esterno dell'aorta. Dopo aver posizionato il trapianto renale del donatore nel fianco sinistro del ricevente.Ripetere la procedura precedente tra la cuffia aortica del donatore e la parete posteriore dell'aorta del ricevente. È importante ricordare che l'anastomosi della vena e dell'arteria deve essere completata entro 20 minuti. L'innesto deve inoltre essere risciacquato più volte con soluzione fisiologica fredda durante l'anastomosi.Eseguire un'anastomosi termino-laterale tra la vena renale del donatore e la parete posteriore della vena cava inferiore del ricevente utilizzando quattro o cinque punti continui in nylon 10 oh all'interno della vena cava inferiore. Chiudere la parete anteriore della vena cava inferiore e la vena renale del donatore con quattro o cinque punti continui all'esterno della vena cava inferiore. Il passo successivo consiste nel dividere la cupola della vescica del ricevente.Fermare l'emorragia con la cauterizzazione. Una volta completata l'immobilizzazione, praticare un piccolo taglio sulla cupola e posizionare due punti di sutura di nylon 10-0 per anastomizzare la piccola toppa vescicale del donatore con la cupola vescicale del ricevente; suturare ciascun lato dell'anastomosi con otto-dieci punti continui. Infine, chiudere l'addome in due strati con suture continue di vicryl sintetico assorbibile sterile 4-0.Le cure postoperatorie iniziano somministrando una singola iniezione intramuscolare di penicillina. Al ricevente del trapianto viene inoltre somministrata buprenorfina a una dose di 0,05 milligrammi per chilogrammo per via intramuscolare al giorno zero e al giorno uno dopo l'intervento per il controllo del dolore, insieme a un'offerta continua di acqua contenente sulfa trim. Le prime 24 ore dopo l'intervento, l'animale viene mantenuto in un incubatore a temperatura controllata.I punti di sutura cutanei vengono rimossi due settimane dopo l'intervento chirurgico. La rimozione del rene nativo residuo è essenziale per poter monitorare il declino della funzione del trapianto renale mediante la misurazione della creatinina sierica. Tale procedura viene generalmente eseguita da quattro a sette giorni dopo il trapianto iniziale del rene donatore e prevede i principali passaggi utilizzati durante l'escissione del rene dal topo donatore.L'anestesia con isoflurano viene utilizzata per sedare l'animale ospite in modo da poter prelevare campioni di sangue. I livelli quantitativi di creatinina nel sangue intero retroorbitale sono utilizzati come indicatore per valutare la funzionalità del trapianto e vengono determinati mediante un analizzatore clinico portatile I stat. Le unità convenzionali vengono convertite in unità SI moltiplicando le unità convenzionali per 88,4.La concentrazione di creatinina è espressa in micromoli per litro. Gli animali di solito si riprendono da due a tre ore dopo l'intervento chirurgico e mostreranno un comportamento normale da topo dopo la rimozione del rene nativo residuo. La sopravvivenza dell'animale dipende dalla funzionalità del trapianto renale, che può essere valutata mediante esami giornalieri dello stato di salute generale dell'animale e della creatinina.Misurazione del sangue intero mediante un analizzatore clinico portatile i-STAT come riferimento. Un topo normale non trapiantato presenta un livello di creatinina vicino a 20 micromolare. La disfunzione del trapianto renale è considerata quando il topo mostra segni di malattia e il livello di creatinina è elevato, raggiungendo circa 100 micromolare.Vi abbiamo appena mostrato la procedura per il trapianto renale nel topo. Sebbene questa procedura sia tecnicamente complessa, il nostro laboratorio ha ottenuto notevoli successi nel realizzarla. Questo è tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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