Murino procedura trapianto renale

La procedura di trapianto di rene di topo inizia con un prelievo di organi da donatore in cui il rene sinistro viene rimosso dal topo donatore e conservato su ghiaccio. Il rene destro viene rimosso dal topo ricevente per fare spazio al rene del donatore. Il rene del donatore viene quindi rimosso dal ghiaccio e trapiantato nel topo ricevente.

Il topo viene lasciato riprendersi per quattro giorni prima che il rene nativo rimanente venga rimosso. Dopo sette giorni, i livelli di creatinina vengono monitorati utilizzando un analizzatore clinico portatile I STAT per valutare la funzione del trapianto. Ciao, sono Sarah Heimer del laboratorio del Dr.Greg Hadley e del Dipartimento di Chirurgia dei Trapianti dell'Ohio State University.

Oggi vi mostreremo una procedura per il trapianto renale nel topo. L'intervento di trapianto renale che vedrai oggi sarà eseguito dal nostro neurochirurgo esperto residente Jing Wing. Si prega di utilizzare questa procedura nel nostro laboratorio per studiare gli eventi immunologici del rigetto del trapianto e le strategie per prevenire il rigetto.

Quindi iniziamo. Per iniziare il prelievo di organi da donatore, viene eseguito un pizzico di traino per garantire che l'animale sia completamente anestetizzato lavorando all'interno di un campo sterile e utilizzando strumenti sterilizzati, praticare un'incisione sulla linea mediana nel topo anestetizzato dallo sterno al pube ed esporre il rene sinistro spostando l'intestino lateralmente sul lato destro per eseguire la perfusione del rene del donatore. TY quattro otto oh suture di seta attorno all'aorta e alla vena cava inferiore sotto e sopra l'arteria renale e la vena.

Perfuso lentamente in situ con soluzione di lattato di ringers eparinizzata a freddo attraverso l'aorta infrarenale. Isolare il rene sinistro legando e dividendo i vasi surrenali e testicolari di alcuni rami lombari con una sutura di seta da otto oh. Successivamente, mobilizzare la giunzione dell'aorta e della vena cava inferiore con l'arteria renale sinistra e legare la vena quattro otto suture di seta oh attorno all'aorta e la vena cava inferiore sotto e sopra l'arteria renale e la vena.

Per ridurre al minimo il sanguinamento, legare l'aorta prima sotto il vaso renale. Quindi sezionare l'uretere sinistro libero dall'ilo renale alla vescica. Esporre l'uretere della giunzione vescicola utilizzando la retrazione della coda sulla cupola della vescica.

Essere sicuri di evitare l'uretere destro asporta una piccola macchia ellittica della vescica contenente la giunzione della vescicola ureterale sinistra. Questo cerotto sarà utilizzato per la ricostruzione urinaria attraverso un'anastomosi da vescica a vescica. Quindi legare l'aorta sopra l'arteria renale e la vena.

Perfuso lentamente la zattera in situ con una soluzione di lattato di ringers eparinizzata a freddo attraverso l'aorta infrarenale. Dividere l'aorta obliquamente circa due millimetri sotto l'arteria renale. Infine, rimuovere il rene e il suo apporto vascolare con l'uretere attaccato al cerotto vescicale sul blocco.

Il rene deve essere conservato nella soluzione di lattato di Ringer su ghiaccio fino a quando non è pronto per essere innestato nel ricevente ospite e sopprimere il topo donatore mediante lussazione cervicale in anestesia. Come dimostrato in precedenza, il trapianto ricevente viene avviato con un pizzico per garantire che l'animale sia completamente anestetizzato. Per iniziare l'intervento, praticare un'incisione sulla linea mediana, coprire l'intestino con una garza bagnata e ritrarlo con cura sul lato sinistro.

Per completare con successo questo trapianto di rene, l'anastomosi deve essere eseguita tra la cuffia aortica del donatore e l'aorta del ricevente. La vena renale del donatore alla vena cava inferiore del ricevente e il cerotto della vescica del donatore alla vescica del ricevente. L'uretere destro, l'arteria renale e la vena.

Rimuovere il rene dopo la legatura. I rami lombari isolano accuratamente e bloccano l'aorta infrarenale e la vena cava inferiore con due morsetti microvascolari da quattro millimetri. Posizionare una sutura di nylon da 10 OH attraverso l'intero spessore dell'aorta e ritrarla per eseguire un'otomia dell'aorta ellittica con un singolo taglio a circa un quinto del diametro del vaso.

Successivamente, eseguire una venotomia longitudinale perforando la vena cava inferiore con un ago calibro 30 ed estendere in modo appropriato utilizzando le micro forbici. Irrigare sia l'aorta che la vena cava inferiore con soluzione salina eparinizzata per eliminare il sangue intraluminale o i coaguli. Rimuovi il rene del donatore dal ghiaccio e posizionalo sul fianco destro del topo.

Posizionare due suture di permanenza all'apice prossimale e distale dell'otomia dell'aorta della ricevente con la cuffia aortica del donatore. Eseguire un'anastomosi laterale tra la cuffia aortica del donatore e la parete anteriore dell'otomia dell'aorta del ricevente utilizzando due o tre suture continue di nylon da 10 OH all'esterno dell'aorta. Dopo aver girato l'innesto di rene del donatore sul fianco sinistro del ricevente.

Ripetere la procedura precedente tra la cuffia aortica del donatore e la parete posteriore dell'aorta del ricevente. Otomia. È importante ricordare che l'anastomosi sia della vena che dell'arteria deve essere terminata entro 20 minuti. L'innesto deve anche essere risciacquato più volte con soluzione salina fredda durante l'anastomosi.

Eseguire un'anastomosi end-to-side tra la vena renale del donatore e la parete posteriore della vena cava inferiore del ricevente utilizzando da quattro a cinque suture continue di nylon da 10 OH all'interno della vena cava inferiore. Chiudere la parete anteriore della vena cava inferiore e la vena renale del donatore con quattro o cinque suture continue al di fuori della vena cava inferiore. Il passo successivo è dividere la cupola della vescica ricevente.

Fermare l'emorragia con la cauterizzazione. Una volta completata la taratura, fare un piccolo taglio sulla cupola e posizionare due suture di stecca di nylon da 10 oh per anastomizzare il piccolo cerotto vescicale del donatore con la sutura della cupola vescicale del ricevente su ciascun lato dell'anastomosi con 8-10 punti continui. Infine chiudere l'addome in due strati con suture sintetiche riassorbibili continue a quattro o sterili.

La cura postoperatoria inizia con la somministrazione di una singola iniezione intramuscolare di penicillina. Al ricevente del trapianto viene anche somministrata 0,05 milligrammi per chilogrammo di buprenorfina per via intramuscolare il giorno zero e il primo giorno dopo l'intervento chirurgico per il dolore, nonché una fornitura continua di acqua contenente sulfamidici. Le prime 24 ore dopo l'operazione sono conservate in un'incubatrice a temperatura controllata.

Le suture cutanee vengono rimosse due settimane dopo l'intervento. La rimozione del rene nativo rimanente è essenziale in modo che il declino della funzione del trapianto renale possa essere monitorato mediante misurazioni della creatinina sierica. In genere viene eseguito da quattro a sette giorni dopo l'innesto iniziale del rene del donatore e coinvolge i passaggi principali impiegati per l'asportazione del rene dal topo donatore.

L'anestesia al fluoro ISO viene utilizzata per sedare l'animale ospite in modo da poter raccogliere campioni di sangue. I livelli quantitativi retroorbitali di creatinina nel sangue intero vengono utilizzati come lettura per valutare la funzione del trapianto e vengono determinati utilizzando un analizzatore clinico portatile I stat. Le unità convenzionali vengono convertite in unità SI moltiplicando le unità convenzionali per 88,4.

La concentrazione di creatinina è espressa in micromoli per litro. Gli animali in genere si riprendono due o tre ore dopo l'intervento chirurgico e mostrano un comportamento normale del topo dopo la rimozione del rene nativo rimanente. La sopravvivenza dell'animale dipende dalla funzione del trapianto renale, che può essere valutata mediante esami giornalieri della salute generale dell'animale e della creatinina.

Misurazione del sangue intero utilizzando un analizzatore clinico portatile i-STAT come riferimento. Un topo normale non trapiantato ha un livello di creatinina vicino a 20 micromolari. La disfunzione del trapianto renale è presa in considerazione quando il topo mostra segni di malattia e il livello di creatinina è elevato vicino a 100 micromolari.

Vi abbiamo appena mostrato la procedura per il trapianto renale nel topo. Sebbene questa procedura sia tecnicamente impegnativa, il nostro laboratorio ha avuto un grande successo nell'eseguirla. Quindi questo è tutto.

Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.