Trasferimento nucleare in oociti mouse

Quindi facciamo il trasferimento nucleare NU perché il nostro gruppo è interessato alla riprogrammazione. Questo è un processo affascinante in quanto il nucleo differenziato può essere riprogrammato in uno stato embrionale. Questi sono i reagenti SUM e HCCV e questa è la ialuronidasi.

E per prima cosa preparo un piatto con, e questo andrà alle incubatrici per equiparare a una CO2. Queste sono gocce, sono diverse gocce per Turing che ricoperte di olio minerale. Quindi calibrano l'atmosfera di CO2.

Ora fai cadere HCZB. Questo verrà utilizzato per il lavaggio. Questo è alto nei giorni e di nuovo coperto da questo olio minerale.

Questo sballo, questo scende con ialuronidasi. Questa parte qui sono solo gocce HCCP. Questi sono per il lavaggio.

Questo serve per rimuovere le celle ulu dal lato O. Questa fase è riscaldata, quindi si riscalderà fino a quando non torno e ricevo i segni dell'olio dai topi e copro tutto con olio minerale. Questo qui sono gocce PVP per la pulizia dell'ago e per l'inserimento delle cellule, e questo è HCCB più Cyla B.E qui farò le manipolazioni.

Ok, questo qui è un colore dell'ago. Quello che sto facendo ora è tirare un ago. Va bene, ora ho un ago molto bello, molto sottile.

E ora questa è una micro fucina. Devo tagliare l'ago in una certa posizione per avere la pipetta di tenuta della misura giusta. Riscaldo la palla di vetro, scendo con l'ago che si scioglie e ora si è rotta.

Respingo questo. Vedi, l'ago rotto è perfetto. Adesso scendo qui, spingo su il calore.

Ora la palla di vetro diventerà rossa, si scioglierà, spingerà la palla di vetro e farà una curva. Basta così. Lo tolgo.

Vedete, poi inserisco l'ago. Abbiamo appena fatto in modo che la pipetta di tenuta la inserisse in questa testa. Ora reinseriscilo nel microscopio.

Micro pipetta, capillare e ho caricato con mercurio. L'ho caricato in questo suggerimento. Il mercurio carica questo capillare qui con il mercurio.

Entra dentro. Posiziona l'ago qui in questa testa. Avvitare saldamente, tirarlo indietro.

Ruotando in senso orario qui spingerai il mercurio qui in avanti in modo da poterlo vedere. E ora la punta nell'olio. Vedere? Quindi ora mi sto muovendo verso il basso per ottenere la visione.

Espellere alcune goccioline di mercurio e aspirare un po' di QVP. Va bene. E poi spostarlo di nuovo verso l'alto.

Vado all'HCCB e mi muovo giù per il buco. La mia testa, vado a P, che è la pipetta del topo. Devo preparare un capillare per inserirlo qui. Grazie.Già.Bene.

Quindi fai un po' di capillare. Ok. E nel tubo. Sono ley.

Vengo dalla Svizzera e ho iniziato questo lavoro un anno fa, sono venuto al laboratorio di K'S e ho iniziato a imparare il trasferimento nucleare. È davvero, è un posto fantastico qui ed è fantastico lavorare qui. E, naturalmente, questo è un esperimento molto complesso e molti problemi possono sorgere mentre lo si fa.

Quindi, quando si inizia, si possono incontrare problemi come molte cellule che lizzano mentre si nuclea o durante il trasferimento. Oppure scopri che anche se ti trasferisci con successo, non si sviluppano. E ci sono sempre, possono essere numerose le ragioni.

Intendo dire che si può partire dal sistema culturale di tutti i siti. Quindi c'è sempre bisogno di alcuni controlli, come le parti del controllo genetico o alcuni imperatori fecondati per testare il sistema di coltura, le incubatrici. E poi è necessario migliorare anche le abilità del microscopio.

Quindi ci vuole solo molta pratica prima di poter inare in modo affidabile il lato e poi trasferirsi indietro. Questa è solo una questione di pratica e ci prenderemo alcune settimane o mesi prima che tu sia bravo a farlo. E per il resto è pronto per lunghi esperimenti.

Quindi è bene riservare un'intera giornata per questo. E poi qualcosa di complicato all'inizio è anche il pipettaggio del mouse. Quindi non fare bolle, per controllarlo bene e non perdere la supervisione o soprattutto si può anche danneggiare un clone, in particolare perché lo strato esterno, il so della lucita è aperto, è effettivamente possibile quando si fa la bocca, si danneggia quel clone e in un certo senso fuoriesce da quella lucita del sonar.

Quindi, quando è necessario anche fare attenzione a non avere olio in quel tubo della bocca. Non succhiare troppo e non soffiare troppo, ma questo è relativamente facile da acquisire, questa abilità.