Name: Topo surrenale cromaffini cella di isolamento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Impara l'isolamento delle cellule cromaffini della midollare surrenale per studiare il coupling eccitazione-secrezione in vitro. Questo metodo consente di ottenere sospensioni cellulari pure per ricerche in neurobiologia e endocrinologia.

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Abbreviazioni: ACC - surrenale cellule cromaffini, E. Soln - soluzione enzimatica, E. DMEM - Arricchito Dulbecco modificato Aquila Media <ol><li> Preparazione <ol><li> Aggiungi alla papaina quantità desiderata di E. Soln (40 unità papaina / 1ml E. Soln.). </li><li> Attivare la papaina con CarboGen per circa 15 minuti in ghiaccio. Buffer di ossigenare di Locke sul ghiaccio pure. </li></ol></li><li> Dissezione <ol><li> Utilizzare il mouse 8-10 settimana. </li><li> Prima di rimuovere la digestione ossigenato tampone di Locke e posto sul ghiaccio. </li><li> Fare riferimento al video per la procedura di dissezione. </li><li> Una volta asportato, ghiandole posto in ossigenato buffer di Locke. </li></ol></li><li> Preparazione di Gland <ol><li> Rimuovere il grasso dalla ghiandola. </li><li> Striscia di corteccia dalla ghiandola. </li></ol></li><li> Digestione enzimatica <ol><li> Filtro sterile ossigenato papaina. </li><li> Fare quattro piscine di papaina ossigenata su una piastra di Petri. <ol><li> 3 piscine dovrebbe essere di circa 100uls. </li><li> 1 del pool dovrebbe essere di circa 400uls. </li></ol></li><li> Lavare medullae attraverso piscine <ol><li> 1 al 3 piscine 100ul. </li><li> Poi attraverso il pool 400ul </li><li> Pippette 300ul E. Soln e midollo pezzi da piscina 400ul in provetta per microcentrifuga. </li><li> Qrap parafilm in provetta da microcentrifuga e porre in bagno d&#39;acqua a 37 ° C per 20 min. </li><li> Ricordatevi di continuare a ossigenare restanti E. Soln contenenti papaina. </li><li> Dopo 20 minuti filtro sterile più E. Soln. </li><li> Sostituire il vecchio E. medullae balneari Soln con nuova filtrata E. Soln. </li></ol></li></ol></li><li> Triturazioni <ol><li> Aspirare e scartare E. Soln. </li><li> Lavare medullae in 1 ml E. DMEM. </li><li> Aspirare e scartare E. DMEM. </li><li> Aggiungi 300ul E. DMEM e triturare 20X con 1 ml di punta. </li><li> Taglio punta 200ul con lama di rasoio sterile. </li><li> Triturare 5-10X con punta tagliata 200ul. </li><li> Scartare E. DMEM pezzi medullae bagno. Media conterrà detriti. </li><li> Aggiungi 300uls fresca E. DMEM medullae a pezzi. </li><li> Triturare con punta 200ul 20x </li><li> Pippette E. DMEM per microcentrifuga tubo withough pezzi medullae. Media conterrà ACC libero. </li><li> Aggiungi 300uls fresca E. DMEM medullae a pezzi. </li><li> Triturare medullae con un ago da siringa 23,5 calibro 20x. </li><li> Combina E. DMEM da entrambe le triturazioni. Pezzi Medullae non dovrebbe essere presente e ora dovrebbe avere un aspetto piume. </li></ol></li><li> Placcatura <ol><li> Microcentrifuga E. DMEM dagli ultimi due passi triturazione per 2,5 minuti a 3.7g s. </li><li> Risospendere le sfere in 50uls-200 E. DMEM, a seconda esperimenti successivi. </li><li> Piastra 10-30uls su un vetrino di vetro. </li><li> Attendere 15 minuti per le cellule di aderire. </li><li> Aggiungi 750uls di E. DMEM. </li></ol></li></ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

topo surrenale cromaffini cella di isolamento

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

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Topo surrenale cromaffini cella di isolamento

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Biologia

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Topo surrenale cromaffini cella di isolamento

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