Name: Imaging bioluminescenza di eme ossigenasi-1 sovraregolazione alla Procedura di Gua Sha (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-28T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Scopri l'imaging bioluminescenza per studiare la sovraregolazione di eme ossigenasi-1 nel topo dopo la procedura di Gua Sha. Questa tecnica permette di osservare gli effetti sistemici della terapia tradizionale cinese in tempo reale.

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K. Wong, Wong STC sono supportati da finanziamenti funzionali e Molecular Imaging Center, Brigham e l&#39;ospedale delle donne K. Wong, Wong STC sono supportati dal Centro per le Biotecnologie e Informatica, Il Methodist Hospital Research Institute, Weill Cornell Medical College. KK Kwong, I. Chen, JQ Ren sono supportate dal finanziamento della A. Athinoula Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital. Lenuta Kloetzer, Braden Kuo sono supportati da un finanziamento della Neuroenteric Research Center, Massachusetts General Hospital Gli autori ringraziano Drs. D. Zeng e X. Xu di Optical Imaging Lab, Brigham and Women Hospital per l&#39;assistenza tecnica.

<ol><li> Femmina topi transgenici HO-1-luciferasi (età di 4-6 settimane) possono essere acquistati presso Taconic Farms, Inc. All&#39;arrivo, i topi sono collocati in una struttura di stabulazione degli animali per almeno 4 giorni per consentire alloggio. </li><li> Preparazione per l&#39;imaging bioluminescenza: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Pesare ogni HO-1 del mouse. Peso dell&#39;animale è necessario per calcolare il dosaggio di luciferina. </li><li> Depilazione: usare uno swap di cotone per applicare i capelli rimozione Nair ® sopra l&#39;addome e / o posteriore dell&#39;animale. In attesa di 5 a 10 secondi. Utilizzare uno scambio di cotone pulito per togliere i capelli. Immergere un pezzo di tessuto in acqua distillata per pulire i capelli rimanenti. </li><li> Posizionare un non-fluorescente carta nera (Strathmore Artagain ® carta nera) sulla piattaforma di imaging di una stazione 100 IVIS per ridurre il rumore di fondo. </li><li> Preparare luciferina (da Xenogen Corporation) soluzione a concentrazione di 7,5 mg / ml (sciolto in sterili H 2 O). La dose di luciferina è 65,5 mg / kg di peso corporeo. Così, a 20 grammi del mouse richiede l&#39;iniezione intraperitoneale di 0,175 ml di soluzione luciferina. Per raggiungere questo obiettivo, un volume singola iniezione di luciferina soluzione (0.175ml) è precaricata ad una siringa con una 26-gauge </li></ol></li><li> Gua Sha procedura: Gua Sha viene applicata una sola volta prima di eseguire il protocollo di imaging bioluminescenza. Dal Gua Sha non è doloroso, il mouse ha solo bisogno di essere brevemente anestetizzati da isoflurano di mantenere la calma. Gua Sha procedura prevede le seguenti fasi: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Applicare l&#39;olio da cucina o acqua distillata per lubrificare le zone della pelle bersaglio Gua Sha un paio di volte durante la procedura di Gua Sha. </li><li> Ripetutamente raschiare i capelli regione libera della parte posteriore del mouse in vigore gentile ma fermo con un cucchiaio di ceramica zuppa o un cucchiaio di plastica. </li><li> La raschiatura continua fino a quando la pelle diventa rossa posteriore, che è un segno di stravaso di sangue sottocutaneo, solitamente raggiunta entro 2 o 3 minuti. </li></ol></li><li> Di imaging bioluminescenza può essere iniziato immediatamente o dopo molte ore Gua Sha come HO-1 upregulation è costruita lentamente nel corso di poche ore. La procedura per l&#39;imaging bioluminescenza è: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Anestetizzare il mouse in una camera di induzione dell&#39;anestesia riempito con una miscela di aria isoflurano grado (1,5%) e medici. </li><li> Una volta che il mouse è anestetizzato, spostare il mouse alla camera di imaging sulla stazione 100 IVIS di imaging ottico. Posizionare il mouse in posizione supina (ventre in su). La camera di imaging è continuamente infuso con 1,5% di isoflurano. La piattaforma di imaging viene riscaldato a 37 ° C per mantenere caldo il mouse. </li><li> Impostare l&#39;acquisizione di immagini a &quot;binning medio&quot; e tempo di esposizione impostato a 30 secondi. Avvio di acquisire le immagini. Impostare la macchina di ripetere l&#39;acquisizione di immagini ogni tre minuti, manualmente o automaticamente. Dopo l&#39;acquisizione della prima immagine, una regione di interesse (ROI) è disegnato per coprire le addominali, al torace, e la zona della testa. Questo ROI è poi copiato e incollato le seguenti immagini con &quot;Living Immagine ®&quot;, il software che accompagna il IVIS 100 destinazione. </li><li> Intensità del segnale viene misurata in fotoni al secondo. Tempo di Marco per l&#39;intensità del segnale per raggiungere il suo valore di picco e continuare a immagini con il mouse per circa 5 a 10 minuti dopo l&#39;ora di punta. </li><li> Quando l&#39;acquisizione di immagini in posizione supina è fatto, capovolgere il mouse e adagiarla in posizione prona (backup). Continua l&#39;imaging l&#39;animale per 5 o 10 minuti con il ROI ora disegnato per coprire la schiena e la zona della testa nell&#39;uso dell &#39;&quot;immagine vivente ®&quot; del software. La scelta di imaging posizione prona dopo la posizione supina è arbitraria. Si può scegliere di iniziare con la posizione prona, a seconda degli organi primari di interesse. Un&#39;altra opzione è quella di immagine posizioni supina e prona ad esperimenti separati. </li><li> Quando l&#39;acquisizione di immagini in posizione prona è terminato, spegnere isoflurano e spostare il mouse dalla camera di imaging per la camera di induzione per recuperare. La camera di induzione è infuso con aria medicale e solo il mouse si sveglia di solito in meno di un minuto. </li><li> Salvare i dati di imaging per la post-elaborazione. </li><li> Dopo lo studio di imaging iniziale, le acquisizioni di immagini aggiuntive vengono effettuate per diversi giorni dopo Gua Sha. Un programma campione si ripete l&#39;imaging nell&#39;ora 12 °, 24 ° ora, 36 ore °, 48 ° ora, 72 ore e 120 ore ° ° ma i tempi esatti del programma di imaging è flessibile. Sessioni di imaging addizionali possono essere aggiunti se un lungo follow-up è necessario. Prima di imaging, ripetere la procedura di rimozione dei capelli se i capelli sono ricresciuti. </li></ol></li><li> Per il gruppo di controllo, ripetere tutte le procedure ma saltare Gua Sha (fase 3). Se lo stesso gruppo di topi è utilizzato sia per il controllo e Gua Sha, l&#39;exp controlloeriment deve essere effettuato preferibilmente prima della procedura di Gua sha o almeno un mese dopo. </li></ol> Rappresentante dei risultati: Le immagini bioluminescenza in figura 1 mostra a sovraregolazione vivo di HO-1 in risposta a Gua Sha. Il grafico in Figura 2 mostra la variazione quantitativa temporale oltre 120 ore in flusso ottico (fotoni / sec) dal corpo del mouse stesso relative a Gua Sha ... <img src="/files/ftp_upload/1385/figure1tmb.jpg" alt="figura 1" border="0" /> Figura 1. Da sinistra a destra, immagini rappresentative della vista frontale (supina) del mouse stesso prima di Gua Sha, a 18 ore, 36 ore e 120 ore dopo Gua Sha, rispettivamente. Dopo Gua Sha, si osserva l&#39;andamento del significativo aumento dell&#39;intensità del segnale di organi diversi che comprendono le regioni del tratto gastrointestinale, del tratto genitale, il fegato, i reni (dal punto di vista posteriore, non mostrato), e altri. Si prega di <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure1.jpg">cliccare qui</a> per una versione più grande della figura 1. <img src="/files/ftp_upload/1385/figure2tmb.jpg" alt="figura 2" border="0" /> Figura 2. Modifica quantitativa del flusso (fotoni / sec) dal corpo intero tracciato di oltre 120 ore successive Gua Sha nel topo lo stesso della Figura 1. Si prega di <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure2.jpg">cliccare qui</a> per vedere una versione più grande della figura 2.

<ol><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+potential+therapeutics+based+on+in+vivo+spatiotemporal+transcription+patterns+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1.</a> J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).</li>
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<li>Hoekstra, K. A., Godin, D. V., Cheng, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+heme+oxygenase+in+the+blood+vessel+wall+during+atherogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protective role of heme oxygenase in the blood vessel wall during atherogenesis.</a> Biochem Cell Biol. 82, 351-359 (2004).</li>
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<li>Calabrese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitagenes%2C+dietary+antioxidants+and+neuroprotection+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases.</a> Front Biosci. 14, 376-397 (2009).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nat Med. 4, 245-247 (1998).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Trascrizione di HO-1, una forma inducibile di eme ossigenasi, è upregulated da molti fattori tra cui l&#39;eme, perossido di idrogeno, l&#39;irradiazione UV, ipossia e stress fisici. Immagini del corpo intero come il riferito HO-1 protocollo bioluminescenza fornisce un&#39;istantanea delle sistemica HO-1 espressione di organi multipli. Nei piccoli animali, imaging bioluminescenza permette ad alta sensibilità in vivo quantitativa in tempo reale valutazione longitudinale ottica di alterazioni nell&#39;espressione genica s...

<table><tbody><tr><td>Luciferina</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>P/N 122796</td><td>In precedenza Xenogen</td></tr><tr><td>IVIS 100</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>In precedenza Xenogen</td></tr></tbody></table>

imaging bioluminescenza di eme ossigenasi-1 sovraregolazione alla procedura di gua sha

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

Gua Sha è una terapia tradizionale popolare cinese che impiega la pelle raschiando a causa microvascolare sottocutaneo stravaso di sangue e lividi. Il protocollo per bioluminescenti imaging ottico di HO-1-<em&gt; Luciferasi</emTopi&gt; transgenici riportati in questo manoscritto fornisce una rapida<em&gt; In vivo</emDosaggio&gt; del upregulation della eme ossigenasi-1 (HO-1) l&#39;espressione genica in risposta alla procedura di Gua Sha. HO-1 è nota da tempo per fornire citoprotezione contro lo stress ossidativo. La sovraregolazione di HO-1, valutata l&#39;uscita bioluminescenza, è pensato per rappresentare una risposta antiossidante ai prodotti di emoglobina circolante rilasciati da Gua Sha. Gua Sha è stato somministrato a colpi ripetuti di un cucchiaio bordo liscio sulla pelle lubrificata sul retro o altre parti del corpo mirata del topo transgenico fino petecchie (emorragie scheggia) o ecchimosi (contusioni), indicative di stravaso di sangue dai capillari sottocutanei è stata osservata. Dopo Gua Sha, le sessioni di imaging bioluminescenza sono state effettuate al giorno per diversi giorni per seguire le dinamiche di HO-1 espressione in molteplici organi interni.

Gua Sha, raschiamento tradizionale cinese pelle terapeutiche, provoca stravaso di sangue sottocutaneo microvascolare. Riportiamo un protocollo di imaging bioluminescenza di HO-1-<em&gt; Luciferasi</em&gt; Topi transgenici per dimostrare che Gua Sha sovraregolazione eme ossigenasi-1 (HO-1) in molti organi.

Imaging bioluminescenza di eme ossigenasi-1 sovraregolazione alla Procedura di Gua Sha

Il Gua Sha è una terapia popolare tradizionale cinese che utilizza il raschiamento della pelle per causare stravaso ematico microvascolare sottocutaneo ed ecchimosi. Il protocollo...

Ciao, sono Jeffrey Young della divisione di Neuroradiologia del Dipartimento di Radiologia del Brigham Women's Hospital, un ospedale didattico della Harvard Medical School. Ciao, sono Brad Quo. Sono dell'unità di gastroenterologia e del Dipartimento di Medicina, nonché del Martino Center for Radiology del Massachusetts General Hospital.Oggi vi mostreremo un procedimento per l'imaging della bioluminescenza della regolazione dell'ossigenasi uno in un modello di topo vivo. Utilizziamo questa tecnica nel nostro laboratorio per studiare la regolazione sistemica dell'ossigenazione dell'emina. Uno con un procedimento chiamato guha, una tecnica della medicina tradizionale cinese che prevede il raschiamento della pelle.Iniziamo. Le topoline transgeniche femmine HO-1 luciferasi vengono pesate prima di essere anestetizzate, in modo da poter calcolare successivamente la corretta dose di luciferina prima di iniziare la rimozione dei peli. Verificare che i topi siano completamente anestetizzati controllando l'assenza del riflesso alla pressione sulle dita dei piedi.Quindi utilizzare un batuffolo di cotone per applicare una lozione depilatoria sulla schiena dell'animale. Attendere da cinque a dieci secondi, quindi usare un batuffolo di cotone pulito per rimuovere i peli. Successivamente, immergere un pezzo di carta in acqua distillata e utilizzare la carta per pulire i peli rimanenti. Applicare acqua distillata più volte durante la procedura per lubrificare le aree cutanee interessate dalla gua.Scrapare delicatamente ma con fermezza la regione priva di peli sulla schiena del topo utilizzando un cucchiaio di plastica. Continuare lo scraping fino a quando la pelle della schiena diventa rossa, segno di extravasazione ematica sottocutanea. Questo di solito si ottiene entro due o tre minuti.Posizionare i topi nella camera di induzione mentre si prepara la soluzione di Lucifero, che verrà mostrata nella prossima sezione. Preparare una soluzione di Lucifero a 7,5 milligrammi per millilitro sciogliendo il Lucifero in acqua sterile. La dose di Lucifero è di 65,5 milligrammi per chilogrammo di peso corporeo.Caricare una siringa con un ago da 26 gauge con un'unica aliquota contenente la dose completa di soluzione di Lucifera. Iniettare rapidamente l'ago nell'addome del topo ed erogare l'intera dose in una singola iniezione. Posizionare un pezzo di carta nera non fluorescente sull'area di imaging di una stazione IVUS 100.Per ridurre il rumore di fondo durante l'acquisizione delle immagini. Per iniziare l'acquisizione, trasferire il topo nella camera di imaging sulla stazione di imaging ottico IVUS 100. La camera di imaging viene continuamente infusa con il 1,5% di isoflurano per mantenere il topo anestetizzato; posizionare il topo in posizione supina.Pancia verso l'alto. Impostare l'acquisizione delle immagini su intensità media e il tempo di esposizione su 30 secondi. Impostare la macchina in modo che ripeta l'acquisizione delle immagini ogni tre minuti, manualmente o automaticamente.Iniziare l'acquisizione delle immagini dopo aver ottenuto la prima immagine. Disegnare una regione di interesse o ROI che copra le aree dell'addome, del torace e della testa. Successivamente, copiare questa ROI e incollarla nelle immagini successive.Utilizzando il software di imaging in tempo reale, l'intensità del segnale viene misurata in fotoni al secondo. Registrare il tempo necessario affinché l'intensità del segnale raggiunga il valore massimo e continuare l'acquisizione di immagini del topo per circa cinque-dieci minuti. Dopo il tempo di picco, una volta terminata l'acquisizione delle immagini in posizione supina, girare il topo e posizionarlo in posizione prona.Indietreggiare questa volta, disegnare la regione di interesse (ROI) per coprire le aree della schiena e della testa. Dopo aver acquisito la prima immagine, continuare a effettuare l'acquisizione sull'animale per cinque-dieci minuti. Al termine dell'acquisizione delle immagini in posizione prona, spegnere l'isoflurano.Trasferire il topo dalla camera di imaging alla camera di induzione. Per il recupero. La camera di induzione viene ora infusa solo con aria medica, e il topo dovrebbe riprendere conoscenza in meno di un minuto.Salvare i dati di imaging per la post-elaborazione. Dopo l'imaging iniziale, vengono effettuati ulteriori cicli di imaging per diversi giorni successivi alla procedura gua. Prima dell'imaging, ripetere la procedura di rimozione del pelo sul dorso dei topi.Se il pelo è ricresciuto in vivo, si osserva un'upregolazione di HO uno in risposta a guha. La vista frontale dello stesso topo è mostrata prima di guha a 18 ore, 36 ore e 120 ore dopo guha da sinistra a destra rispettivamente. Come si può vedere, l'intensità del segnale di bioluminescenza aumenta progressivamente in multipli organi dopo gu sha.Questo grafico mostra il cambiamento temporale quantitativo nell'arco di 120 ore del flusso ottico proveniente dall'intero corpo dello stesso topo. In risposta alla procedura guha, hai appena osservato come effettuare l'imaging dell'upregolazione in vivo dell'emc ossigenasi uno mediante imaging bioluminescente. Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante mantenere pulita la zona da sottoporre a imaging, per evitare interferenze dovute a polvere e peli.Controllo accurato del tempo di esposizione è necessario per evitare la saturazione nei risultati di imaging. Questo è tutto.Grazie mille per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Presentiamo un protocollo per visualizzare direttamente le attività metaboliche nelle cellule regolate da aminoacidi utilizzando la microscopia a diffusione Raman stimolata (DO-SRS) con ossido di deuterio (acqua pesante D2O), che è integrata con la microscopia a fluorescenza di eccitazione a due fotoni (2PEF).

Imaging chimico bioortogonale del metabolismo cellulare regolato da amminoacidi aromatici

Questo protocollo descrive una procedura standardizzata e passo dopo passo per eseguire Gua Sha in pietra Bian di rame su soggetti umani diagnosticati con sindrome da stanchezza cronica. La tecnica prevede l'applicazione di uno schioppo in lega di rame su specifiche vie di meridiano (Governor Vessel e Meridiano della Vescica) e punti di agopuntura designati. Sono inclusi dati osservazionali rappresentativi pre e post intervento per illustrare il flusso di lavoro procedurale e i metodi di...

Un protocollo standardizzato di rame Bian-Stone Gua Sha per il trattamento della sindrome da fatica cronica nei soggetti umani

Scopri l'imaging bioluminescenza per studiare la sovraregolazione di eme ossigenasi-1 nel topo dopo la procedura di Gua Sha. Questa tecnica permette di osservare gli effetti sistemici della terapia tradizionale cinese in tempo reale.

Imaging bioluminescenza di eme ossigenasi-1 sovraregolazione alla Procedura di Gua Sha

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