Name: Eterotopica e trapianto ortotopico tracheale in topi utilizzati come modelli per studiare lo sviluppo della malattia delle vie aeree obliterante (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-20T18:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Impara i modelli di trapianto tracheale eterotopico e ortotopico nei topi per studiare la malattia delle vie aeree obliterante. Queste tecniche chirurgiche aiutano a comprendere i meccanismi della malattia e le complicanze post-trapianto.

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Gli autori ringraziano Christiane Pahrmann (Lab Manager).

<ol><li> Maschio topi BALB / c (8-12 settimane) sono acquistati da Charles River Laboratories (Sulzfeld, Germania). I topi sono alloggiati in condizioni convenzionali, i topi nutriti standard di cibo e acqua ad libitum. </li><li> 2% Isofluran viene utilizzato per l&#39;anestesia. </li></ol> DONATORE DI PREPARAZIONE <ol><li> Radersi i capelli addominale e disinfettare la zona con betaisodona. </li><li> In vista microscopico, eseguire una incisione mediana cervicale dal livello della laringe allo sterno. </li><li> Rimuovere il grasso sottocutaneo e dei muscoli cinghia per ottenere una visione chiara della trachea. </li><li> Sezionare la trachea da qualsiasi tessuti circostanti, come l&#39;esofago, nervi, arterie e del tessuto connettivo. </li><li> Rimuovere tutta la trachea (dalla laringe alla biforcazione). </li><li> Lavare il trapianto con soluzione fisiologica fredda e riporre l&#39;innesto a 4 ° C. </li><li> Il donatore è eutanasia da dislocazione cervicale dopo la raccolta della trachea. </li></ol> DESTINATARIO: TRAPIANTO eterotopica <ol><li> Radersi i capelli addominale in un ampio margine intorno al sito di incisione e disinfettare l&#39;area tre volte utilizzando betaisodona (Betadine), seguita dall&#39;alcol. Gli occhi devono essere lubrificati con un prodotto pomata oftalmica per evitare che le cornee si secchi. </li><li> Eseguire una laparotomia mediana e posto l&#39;intestino in una sterile, guanti moistured. </li><li> Stendere il omento maggiore attenzione. Posizionare l&#39;innesto al centro e fissare con una sutura singola utilizzando 8-0 (Prolene, Ethicon, Germania). </li><li> Coprono interamente il trapianto con il omento maggiore e fissare l&#39;innesto con una sutura singola 8-0 (Prolene, Ethicon, Germania). </li><li> Riposizionare l&#39;intestino nuovamente dentro l&#39;addome e lavare con acqua calda, soluzione salina sterile prima della chiusura. </li><li> Primo piano in 2 strati - parete addominale e lo strato di pelle con disegno continuo utilizzando 7-0 Prolene per il muscolo e Vicryl 7-0 per la pelle. </li></ol> DESTINATARIO: trapianto ortotopico <ol><li> Radersi i capelli addominale in un ampio margine intorno al sito di incisione e disinfettare l&#39;area tre volte utilizzando betaisodona (Betadine), seguita dall&#39;alcol. Gli occhi devono essere lubrificati con un prodotto pomata oftalmica per evitare che le cornee si secchi. </li><li> Dividere i muscoli cinghia di visualizzare l&#39;intero complesso laringotracheale. </li><li> Con attenzione sezionare la trachea dai tessuti circostanti, aver cura di conservare i nervi laringeo ricorrente. </li><li> Dividere la trachea tre anelli caudale dalla cricoide. L&#39;animale mantiene la respirazione fisiologica attraverso la tracheostomia. </li><li> Garantire pulizia bordi tracheale nel destinatario così come nel trapianto. </li><li> L&#39;innesto è interposto tra i difetti destinatario tracheale e orientato a mantenere la polarità anatomica. </li><li> Utilizzando 8-0 (Prolene, Ethicon, Germania) anastomizzano l&#39;innesto del donatore con il distale (mediastinica) trachea. L&#39;aspetto posteriore della anastomosi viene eseguita in modo continuo in funzione. L&#39;aspetto anteriore è poi completato con punti di sutura interrotta. </li><li> Rimuovere eventuali secrezioni dalle vie aeree. </li><li> L&#39;anastomosi prossimale è poi completato nello stesso modo come il distale. </li><li> Garantire l&#39;integrità delle vie aeree e adeguata, la respirazione spontanea. </li><li> Spostare i muscoli cinghia e chiudere il tessuto sottocutaneo e lo strato della pelle utilizzando 6-0 punti di sutura (Vicryl, Ethicon, Germania) con disegno continuo. </li><li> Utilizzare l&#39;anestesia iniezione per il destinatario, quindi l&#39;animale manterrà la respirazione fisiologica attraverso la trachea. Una combinazione di 75/1/0.2 mg / kg di propofol, medetomidina e fentanil, rispettivamente, viene utilizzato per l&#39;anestesia ip nei topi. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: trachea del donatore. 1A: trachea del donatore in situ dopo la preparazione. 1B: trachea del donatore escisse. 1C: trachea del donatore dopo espianto. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: Modello eterotopica. 2A: L&#39;innesto è posizionato nel centro del omento maggiore. 2B: L&#39;innesto è fissato su entrambe le estremità con una sutura singola. 2C: L&#39;innesto è avvolto nel omento maggiore e fissato con una sutura singola. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Modello ortotopico. 3A: L&#39;innesto è interposto tra i difetti destinatario tracheale e la parete posteriore è anastomizzato in modo continuo in funzione. 3B: La parete anteriore è completato con una sutura singola. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Istologia. 4A: recuperati trachea trapianto eterotopico dopo 28 giorni in + H E STAesaminando la (15x). Si noti l&#39;obliterazione del 100% del lume. 4B: recuperati ortotopico trachea trapiantati dopo 60 giorni in H + E colorazione (15x). Obliterazione del lume massima raggiunta è di circa il 45%. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Modello trapianto eterotopico tracheale </td><td> Modello trapianto ortotopico tracheale </td></tr><tr><td> Vantaggi </td><td> + Facile da eseguire + Luminal obliterazione con occlusione delle vie aeree completa dopo 28 giorni + Nessuna affetto fisico degli animali da OAD </td><td> + Ventilazione fisica del trapianto + Possibile la somministrazione del farmaco per via inalatoria + Forti reazioni immunologiche come la produzione di anticorpi IgM alloreactive + Ambiente fisiologico toracica + Tracheale-anastomosi tracheale imita il setting clinico </td></tr><tr><td> Svantaggi </td><td> - Non ventilazione del trapiantato trachea - Nessuna valutazione di possibili agenti patogeni per via inalatoria - L&#39;inibizione della clearance mucociliare e secrezioni mantenuto - Microambiente peritoneale invece di ambiente toracica </td><td> - Formazione chirurgica necessaria - Obliterazione Luminal con app occlusione del lume. 45% dopo 60 giorni - Gli animali possono sviluppare sintomi di OAD </td></tr></tbody></table> Tabella 1: Vantaggi e svantaggi dei eterotopica e trapianto ortotopico tracheale.

<ol><li>Adams, B., Berry, G., Huang, X., Shorthouse, R., Brazelton, T., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+therapies+for+the+prevention+and+treatment+of+obliterative+airway+disease+in+heterotopic+rat+trachea+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive therapies for the prevention and treatment of obliterative airway disease in heterotopic rat trachea allografts.</a> Transplantation. 69, 2260-2266 Forthcoming.</li>
<li>Adams, B., Brazelton, T., Berry, G., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+respiratory+epithelium+in+a+rat+model+of+obliterative+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The role of respiratory epithelium in a rat model of obliterative airway disease.</a> Transplantation. 69, 661-665 Forthcoming.</li>
<li>Deuse, T., Schrepfer, S., Reichenspurner, H., Hoyt, G., Fischbein, M., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+experimental+heterotopic+and+orthotopic+tracheal+transplantations+%26%23x2013%3B+when+to+use+which+model%3B+Transplant+Immunology+17%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Techniques for experimental heterotopic and orthotopic tracheal transplantations &#x2013; when to use which model; Transplant Immunology 17.</a> , 255-261 (2007).</li>
<li>Hele, D., Yacoub, M., Belvisi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+tracheal+allograft+as+an+animal+model+of+obliterative+bronchiolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">The heterotopic tracheal allograft as an animal model of obliterative bronchiolitis.</a> Respiratory Research. 2, 169-183 Forthcoming.</li>
<li>Hertz, M., Jessurun, J., King, M., Savic, S., Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American Journal of Pathology. 142, (1993).</li>
<li>McDyer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 4, 37-43 Forthcoming.</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Hoyt, G., Sheikh, A., Hoffmann, J., Reichenspurner, H., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+orthotopic+tracheal+transplantation%3A+the+stanford+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Experimental orthotopic tracheal transplantation: the stanford technique.</a> Microsurgery. 27, 187-189 (2007).</li>
</ol>

Sonja Schrepfer ha ricevuto un assegno di ricerca dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-1).] Tutti gli animali hanno ricevuto assistenza umana in conformità ai principi di cura degli animali da laboratorio, gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla Società Nazionale per la ricerca medica e la Guida per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio pubblicato dalla National Institutes of Health (National Institutes of Health pubblicazione 85-23, revisione 1985). Tutti gli animali sono stati ottenuti da Charles River Laboratories (Sulzfeld, Germania) e sono stati mantenuti in strutture di cura degli animali della Clinica Universitaria di Amburgo Eppendorf. Gli animali hanno ricevuto standard di cibo e acqua ad libitum.

I topi sono disponibili in diverse transgeneic e modello ad eliminazione diretta, e quindi adatto per lo studio meccanicistico domande relative a OAD (4). Entrambi i modelli di trapianto della trachea mostrato in questo video può essere utilizzato come modello affidabile per lo studio dello sviluppo OAD. Tuttavia, ogni modello dimostra vantaggi e limiti. Il trapianto eterotopico tracheale è facile da eseguire e non richiede particolari formazione chirurgica (3,...

eterotopica e trapianto ortotopico tracheale in topi utilizzati come modelli per studiare lo sviluppo della malattia delle vie aeree obliterante

Heterotopic and Orthotopic Tracheal Transplantation in Mice used as Models to Study the Development of  Obliterative Airway Disease

Obliterante malattia delle vie aeree (OAD) è la complicazione maggiore dopo trapianto del polmone che limita la sopravvivenza a lungo termine (1-7). Per studiare la fisiopatologia, il trattamento e la prevenzione di OAD, diversi modelli animali di trapianto della trachea nei roditori sono state sviluppate (1-7). Qui, usiamo due modelli consolidati di trapianto di trachea, il modello eterotopico e ortotopica e dimostrare la loro vantaggi e limiti. Per il modello eterotopico, la trachea del donatore è avvolto nel più grande omento del destinatario, mentre la trachea del donatore viene anastomizzato da end-to-end anastomosi nel modello ortotopico. In entrambi i modelli, lo sviluppo di lesioni istologiche obliterante simile a OAD clinica è stato dimostrato (1-7). Questo video mostra come eseguire entrambi, il eterotopica così come la tecnica di trapianto ortotopico tracheale nei topi, e mette a confronto l&#39;andamento temporale di sviluppo OAD in entrambi i modelli con istologia.

Questo video mostra e mette a confronto due modelli sperimentali per studiare lo sviluppo della malattia delle vie aeree obliterante (OAD) nei topi, il modello eterotopico e trapianto ortotopico tracheale.

Eterotopica e trapianto ortotopico tracheale in topi utilizzati come modelli per studiare lo sviluppo della malattia delle vie aeree obliterante

La malattia ostruttiva delle vie aeree (OAD) è la principale complicazione dopo il trapianto di polmone che limita la sopravvivenza a lungo termine (1-7).
Per studiare il...

Sia il trapianto eterotopico che quello ortotopico della trachea iniziano con l'asportazione della trachea del donatore per il trapianto eterotopico. Viene effettuata una incisione addominale nel ricevente e gli intestini vengono posizionati su un guanto. Per il trapianto ortotopico, la trachea del donatore viene posizionata al centro dell'omento maggiore e fissata con due punti di sutura.Dopo aver effettuato un'incisione cervicale nel ricevente, la trachea viene liberata dal tessuto circostante e recisa. Successivamente, la trachea del donatore viene inserita tra le due estremità della trachea del ricevente e le trachee vengono suturate insieme. Ciao, sono Sonya Refa.Sono professore di Immunologia e chirurgia cardiaca presso il Dipartimento di Chirurgia Cardiovascolare del Centro Cardiologico Universitario di Amburgo. Il mio laboratorio si concentra sull'immunologia del trapianto e sull'immunobiologia delle cellule staminali. Oggi vi presenteremo il modello di trapianto Moon Auto e il modello di trapianto del rene qui.Ciao, sono del laboratorio TSI. Utilizziamo il modello murino di trapianto eterotopico della trachea e l'argomento anche per studiare i meccanismi alla base dello sv

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Bronchiolite obliterante è l'ostacolo chiave per la sopravvivenza a lungo termine del trapianto di polmone e la mancanza di un robusto modello preclinico preclude l'esame di immunopatogenesi bronchiolite obliterante. A differenza di altri trapianti di organi solidi, vascolarizzato del mouse trapianto di polmone solo di recente è stato sviluppato. Qui vi mostriamo il nostro modello sviluppato in modo indipendente bronchiolite obliterante dopo murino ortotopico single-trapianto di polmone.

Sviluppo di bronchiolite obliterante in un modello murino di trapianto polmonare ortotopico

Abbiamo sviluppato un metodo semplice, affidabile e relativamente poco costoso per l'intubazione endotracheale nei topi mediante laringoscopia diretta con un otoscopio con un speculum 2,0 millimetri. Questa tecnica è atraumatica e può essere utilizzato per misurazioni ripetute in esperimenti cronici. Troviamo superiore a tracheostomia o riportato in precedenza tecniche non chirurgiche.

Intubazione endotracheale in Mouse<em&gt; Via</em&gt; Laringoscopia diretta usando un otoscopio

L'uso di un modello che simula la condizione di malattie polmonari nell'uomo è fondamentale per lo studio della fisiopatologia e / o eziologia di una particolare malattia e per lo sviluppo di un intervento terapeutico. Ecco un metodo non invasivo intubazione endotracheale in grado di fornire direttamente i materiali esogeni ai polmoni del mouse è presentato.

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Per studiare l'allotrapianto combinato di organi solidi e composito vascolarizzato, descriviamo un nuovo modello eterotopico di trapianto di parete toracica, timo e cuore nei topi utilizzando una tecnica di cuffia cervicale senza sutura.

A Novel microchirurgica modello per eterotopica, in blocco parete toracica, Timo, e trapianto cardiaco nei topi

Questo articolo presenta un metodo rapido e semplice per l'amministrazione bleomicina direttamente nella trachea del mouse tramite intubazione. I principali vantaggi di questo metodo sono che è altamente riproducibile, facile da padroneggiare, e non richiede attrezzature specializzate o tempi di recupero lunghi.

Un metodo migliore per Rapid intubazione della trachea nei topi

Stenosi dell'innesto per rappresentare un ostacolo critico in sostituzione di tessuto ingegnerizzato delle vie respiratorie. Per studiare i meccanismi cellulari alla base di stenosi, utilizziamo un modello murino di tessuti ingegnerizzati sostituzione tracheale con cellule mononucleari seminato del midollo osseo (BM-MNC). Qui, abbiamo dettaglio nostro protocollo, compreso produzione dell'impalcatura, BM-MNC isolamento, innesto semina e l'impianto.

Semina e impianto di un innesto trachea tessutale biosintetico in un modello murino

Vari modelli animali di ernia diaframmatica congenita e occlusione tracheale fetale presentano vantaggi e svantaggi per quanto riguarda questioni etiche, costi, difficoltà chirurgiche, dimensioni, tassi di sopravvivenza e disponibilità di strumenti genetici. Questo modello fornisce un nuovo strumento per studiare l'impatto sia dell'occlusione tracheale che dell'aumento della pressione luminare sullo sviluppo polmonare.

Modello di occlusione tracheale fetale transuterina nei topi

Lo scopo di questo manoscritto è quello di descrivere le fasi microchirurgiche necessarie per eseguire un trapianto laringeo eterotopico nei topi. I vantaggi di questo modello murino rispetto ad altri modelli animali di trapianto laringeo sono il suo rapporto costo-efficacia e la disponibilità di saggi e dati immunologici.

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Il modello murino di trapianto tracheale intrapolmonare (IPTT) è utile per lo studio della malattia obliterante delle vie aeree (OAD) dopo il trapianto di polmone. Offre approfondimenti sul comportamento immunologico e angiogenico polmonare specifico nell'obliterazione delle vie aeree dopo allotrapianto con elevata riproducibilità. Qui descriviamo la procedura IPTT e i suoi risultati attesi.

Trapianto tracheale intrapolmonare murino: un modello per lo studio della malattia obliterante delle vie aeree dopo il trapianto di polmone

Test di sensibilità visiva in lucertole utilizzando un paradigma di condizionamento operante che si avvale di riproduzione video di casuale-puntino kinematograms e generati dal computer invertebrati.

Test di sensibilità visiva alla velocità e direzione del movimento in lucertole

Impara i modelli di trapianto tracheale eterotopico e ortotopico nei topi per studiare la malattia delle vie aeree obliterante. Queste tecniche chirurgiche aiutano a comprendere i meccanismi della malattia e le complicanze post-trapianto.

Eterotopica e trapianto ortotopico tracheale in topi utilizzati come modelli per studiare lo sviluppo della malattia delle vie aeree obliterante (Video) | JoVE Journal

Eterotopica e trapianto ortotopico tracheale in topi utilizzati come modelli per studiare lo sviluppo della malattia delle vie aeree obliterante

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