Name: Colite Modeling murino utilizzando destrano sodio solfato (DSS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Impara a indurre colite acuta nei topi utilizzando destrano sodio solfato (DSS) nel modello murino. Questo protocollo standardizzato include somministrazione, monitoraggio e preparazione istologica del colon per studiare le malattie infiammatorie intestinali.

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Il finanziamento fornito dal NIH (1 DK080221 K08-01) ei fondi di sviluppo Vanderbilt istituzionali.

Parte 1: Lesioni-Repair Modello Colite <ol><li> Peso di base dovrebbe essere ottenuto per ogni mouse prima dell'inizio del trattamento DSS. </li><li> Effettuare una (w / v) 3% di soluzione di destrano solfato di sodio sale in acqua e filtrare con un filtro da 0,45 micron acetato di cellulosa. </li><li> Sostituire l'acqua potabile nella gabbia del mouse con la soluzione DSS 3% per quattro giorni. I topi non dovrebbero avere accesso a qualsiasi altra fonte d'acqua (punte esclusione cioè immessi sul sistema di irrigazione automatico). </li><li> Il quarto giorno, sostituire la soluzione DSS con l'acqua per altri tre giorni, permettendo una certa ripresa epiteliali del colon. I topi deve essere pesato il quarto giorno al fine di quantificare le conseguenze sistemiche di colite. La perdita di peso è comune con gravi lesioni. </li><li> Il giorno 7, pesare e il sacrificio dei topi. I topi possono essere eutanasia per overdose inalazione di isoflurano o altri istituzionalmente, IACUC approvato i metodi. </li></ol> Parte 2: l'autopsia e la raccolta di Colon <ol><li> Esporre la parte ventrale del mouse e le gambe sicuro per garantire un libero accesso ad all'addome. Bagnare l'addome completamente con il 70% di etanolo. </li><li> Afferrare la linea mediana dell'addome con una pinza tessuti e estendersi verso l'alto così tenda la pelle. Utilizzare forbici a punta fine di incidere l'addome esponendo così il contenuto addominale. Estendere l'incisione a punta del processo xifoideo sulla linea mediana e poi si estendono lungo l'aspetto inferiore del margine costale bilaterale. </li><li> Identificare l'intestino tenue, cieco e del colon. Con attenzione sezionare / stuzzicare i due punti dal mesentere circostante. Transetto i due punti in profondità nella pelvi per liberare il colon distale e del retto. Transetto del colon al margine colonocecal per liberare il colon prossimale. Si deve prestare attenzione durante questo processo non danneggiare i due punti come la pulizia del colon sarà problematico se si verifica la perforazione. </li><li> Utilizzando un ago 20 G di alimentazione e siringa da 10 ml, intubare e sciacquare i due punti con gelida PBS finché l'eluato è del tutto chiaro delle feci. </li><li> A questo punto, se l'analisi macroscopica con un microscopio da dissezione è desiderato, i due punti possono essere fissati come "salsicce". Se l'analisi istologica solo si desidera di passare alla Parte 4 "Fare Rolls svizzera per l'analisi istologica di colite acuta". </li></ol> Parte 3: Elaborazione di "Salsicce" per l'analisi macroscopica di tutto il colon <ol><li> E 'importante mantenere il corretto orientamento del colon, quindi, tenere l'estremità distale del colon più vicina all'operatore. Tagliate due pezzi di sutura non riassorbibili (SP116 1,5 seta intrecciata metrico), uno di circa 1 pollice di lunghezza, gli altri 2 pollici. </li><li> Utilizzare il pezzo da 2 pollici di sutura per legare l'estremità distale più vicino possibile al margine possibile mantenendo comunque una buona tenuta. </li><li> Inserire un ago 20G alimentazione contenente 5 ml di 10% di formalina tamponata fosfato nelle estremità prossimale del colon. Liberamente legare il pezzo rimanente di sutura immediatamente prossimale al bulbo dell'ago alimentazione. Afferrare il colon saldamente al bulbo dell'ago alimentazione e infondere formalina fino a quando il colon è espanso. Stringere il nodo della sutura quando si estrae l'ago di alimentazione, lasciando così l'infuso, colon esteso come una "salsiccia". </li><li> Riempire un tubo da 15 ml con 10% di formalina tamponata fosfato e il luogo del colon nel tubo. Fix per 24 ore. </li><li> Eliminare formalina e sostituire con 70% EtOH per un ulteriore 24 ore. (Due punti possono essere memorizzati in 70% EtOH a tempo indeterminato a temperatura ambiente.) </li><li> Rimuovere i due punti dal tubo conico e tagliare le corde alle estremità con un bisturi, facendo attenzione a non danneggiare il colon. Ricordate che l'estremità distale è il più lungo pezzo di spago. Tagliato longitudinalmente da distale a prossimale del colon in modo da formare un foglio lungo. A questo punto, il colon può essere visto sotto un microscopio da dissezione. </li></ol> Parte 4: Esecuzione di Rolls svizzera per l'analisi istologica di colite acuta <ol><li> E 'importante mantenere il corretto orientamento del colon, quindi, tenere l'estremità distale del colon più vicina all'operatore. </li><li> Misurare la lunghezza del colon. Questo dato è un altro indicatore della gravità della lesione. Colite aumenta l'edema e riduce la lunghezza totale del colon. </li><li> Utilizzando le forbici a punta fine, incidere longitudinalmente da distale a prossimale del colon. Usare bene pinze punta a cogliere uno dei bordi della ferita e aprire lateralmente tuo modo di lavoro-distale&gt; prossimale, visualizzando così i due punti come una lamiera piana. </li><li> Rotolamento del colon richiede un paio di pinze e una tecnica a due mani. Afferrare entrambi i bordi del margine distale con una pinza. Procedere a rotolare i due punti in sequenza ruotando e rilasciando il forcipe di procedere con il margine prossimale. Generando così una spirale con una terza dimensione o "Roll svizzero".Per mantenere la forma arrotolata, afferrare saldamente il rotolo con una pinza e transetto con un 27G1 / 2 ago. Fissare l'ago piegando l'ago quando esce il rotolo. </li><li> Inserire il rotolo in una cassetta tessuto opportunamente etichettato e posto in un vaso del 10% formalina tamponata fosfato a temperatura ambiente per 24 ore per garantire la fissazione dei tessuti. </li><li> Eliminare formalina e sostituire con 70% EtOH per un ulteriore 24 ore. (Due punti possono essere memorizzati in 70% EtOH a tempo indeterminato a temperatura ambiente.) </li><li> Una volta che il campione è stato fissato, esso può essere incluso in paraffina, sezionati e montati su vetrini per l'analisi istologica. </li></ol> Parte 5: Risultati Rappresentante Il modello DSS per la colite acuta consente al ricercatore di ottenere, correggere e analizzare i due punti che i modelli colite acuta. Quando il rotolo svizzero viene tagliato e montato, dovrebbe costituire una fetta rappresentativa di tutto il colon se vi fosse stata correttamente (Figura 1). Il rullo montato può essere colorato con H &amp; E, per determinare l'entità del danno al colon, dal distale (interno) fine alla prossimale (fuori) fine (Figura 2). Immunoistochimica può essere eseguita anche sul rotolo svizzero per identificare e quantificare infiltrati infiammatori. Se il metodo salsiccia è stata eseguita correttamente, i due punti fissi saranno dilatati e l'intera superficie della mucosa può essere facilmente manipolato e osservato al microscopio da dissezione (Figura 3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig1.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig1tmb.jpg" alt="Figura 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"></a> Figura 1. Correttamente-Il eseguito "Swiss roll". (A) I due punti sono rotolato dalla distale a prossimale, sezionato con un ago e garantito piegando la fine dell'ago. E 'poi messo in una cassetta di tessuto per il fissaggio. (B) H &amp; E macchiato sezione 5 micron di un rotolo svizzero fatta dal colon di un topo trattati con DSS (d = colon distale p = colon prossimale). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig2.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig2tmb.jpg" alt="Figura 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"></a> Figura 2. DSS due punti trattati mostrano segni di colite acuta. Danno l'infiammazione e la cripta sono evidenti nel DSS trattati con due punti rispetto a un controllo dell'acqua trattata. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig3.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig3tmb.jpg" alt="Figura 3" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"></a> Figura 3. Un esempio di "salsiccia". La salsiccia infuso con formalina e completamente esteso. Una leggera angolazione sarà presente secondaria alla curvatura naturale del colon. La salsiccia aperto deve essere piatto.

<ol><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).</li>
<li>Martinez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Mtgr1+sensitizes+the+colonic+epithelium+to+dextran+sodium+sulfate-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis.</a> Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).</li>
<li>Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22Swiss+roll%22%3A+a+simple+technique+for+histological+studies+of+the+rodent+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine.</a> Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).</li>
<li>Aharoni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+therapeutic+effect+of+glatiramer+acetate+on+several+murine+models+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease.</a> J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).</li>
<li>Hahm, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+transforming+growth+factor+beta+signalling+in+the+intestine+contributes+to+tissue+injury+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 49 (2), 190-198 (2001).</li>
<li>Green, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+modulation+of+Escherichia+coli+O157%3AH7+adherence+to+the+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).</li>
<li>Dieleman, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li>
</ol>

Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla Vanderbilt IACUC.

Questo protocollo può essere modificato per modello lesioni acute, lesioni di riparazione, o cronica processi di lesioni del colon. Lesioni Modifica acuta: DSS ad lib trattamento per 4-6 giorni, seguita dal sacrificio immediato Infortuni Riparazione Modifica: Lesioni con 4-6 giorni di trattamento DSS seguita da periodo di recupero di 3-4 giorni e il sacrificio (come descritto nel protocollo di cui sopra). <p...

<table><tbody><tr><td>Solfato di sodio della destrana</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>9011-18-1</td><td>peso molecolare 40.000-50.000</td></tr><tr><td>Formalina fosfato tamponata al 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>Cassette TISSUE PATH Macrosette</td><td>Fisher Scientific</td><td>15182706</td><td></td></tr><tr><td>Siringa BD da 10 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Alcol etilico</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>E190</td><td>Diluire al 70% con acqua distillata</td></tr><tr><td>Ago da alimentazione dritto da 20G</td><td>VWR international</td><td>20068-612</td><td></td></tr><tr><td>Ago PrecisionGlide da 27G1/2</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione a punta affilata/ottusa</td><td>VWR international</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Pinze di Waugh</td><td>VWR international</td><td>82027-428</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgica non riassorbibile</td><td>LOOK Surgical</td><td>SP116</td><td></td></tr><tr><td>Carta da filtro Whatman</td><td>VWR international</td><td>28298-020</td><td>Tagliare secondo necessità</td></tr><tr><td>Filtro in acetato di cellulosa senza tensioattivi (SFCA) Nalgene</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06731-2</td><td></td></tr><tr><td>Calibro digitale in composito di fibra di carbonio</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-007-958</td><td></td></tr></tbody></table>

colite modeling murino utilizzando destrano sodio solfato (dss)

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Colite possono essere causati da infezioni virali o batteriche, insulto ischemico, o malattie autoimmuni, in particolare colite ulcerosa e la variante del colon del morbo di Crohn - Colite di Crohn. Colite acuta può presentarsi con dolore e distensione addominale, malassorbimento, diarrea, ematochezia e muco nelle feci. Stiamo cominciando a comprendere le complesse interazioni tra ambiente, genetica, e disfunzione della barriera epiteliale nei modelli di malattia infiammatoria intestinale e animali di colite sono stati essenziali nel portare avanti la nostra comprensione di questa malattia. Un modello popolare prevede che completa l&#39;acqua potabile di topi con basso peso molecolare destrano solfato di sodio (DSS), con conseguente danno epiteliale ed una robusta risposta infiammatoria nel colon di più giorni<sup&gt; 1</sup&gt;. Varianti di questo approccio può essere utilizzato per modellare lesioni acute, lesioni acute seguita da riparare, e ripetuti cicli di DSS intervallati con recupero di modellazione malattie infiammatorie croniche<sup&gt; 2</sup&gt;. Dopo un singolo di quattro giorni di trattamento di 3% DSS in acqua potabile, i topi mostrano segni di colite acuta tra cui la perdita di peso, feci sanguinolente, e diarrea. I topi sono l&#39;eutanasia, a conclusione del ciclo di trattamento e di due punti necroscopia sezionato sono trattati e possono essere &#39;svizzera arrotolato &quot;<sup&gt; 3</sup&gt; Per consentire l&#39;analisi microscopica di tutto il colon o infuso con formalina come &quot;salsicce&quot; per consentire un&#39;analisi macroscopica. Tessuto viene poi inclusi in paraffina, sezionati e colorati per la revisione istologica.

Destrano sodio solfato (DSS) somministrata in acqua potabile è un consolidato modello murino lesioni infiammatorie di colite acuta. Questo protocollo descrive il metodo per il trattamento DSS e la preparazione dei tessuti.

Colite Modeling murino utilizzando destrano sodio solfato (DSS)

La colite può essere causata da infezioni virali o batteriche, insulti ischemici o disturbi autoimmuni; in particolare la colite ulcerosa e la variante colica di...

I topi ricevono il 3% di DSS nell'acqua da bere per quattro giorni. Mentre peso corporeo, presenza di diarrea e sangue fecale vengono registrati quotidianamente, il DSS viene sostituito con acqua autoclavata dopo il quarto giorno. Dopo tre giorni di acqua, i topi vengono soppressi e i loro colon vengono rimossi.I colon sono misurati e pesati. Successivamente, i colon vengono formati in rotoli svizzeri o salsicciotti ed esaminati al microscopio. Questo articolo video illustrerà il prelievo e il trattamento dei colon in un modello murino di colite.Questa procedura viene utilizzata per lo studio della colite nel laboratorio del Dott. Christopher Williams del Dipartimento di Biologia del Cancro della Vanderbilt University, prima di iniziare il trattamento con sodio dextrina solfato. I pesi di base vengono registrati durante tutto il corso dell'esperimento. I pesi giornalieri vengono rilevati dopo aver pesato i topi; preparare una soluzione al 3% peso/volume di sodio dextrina solfato, o DSS, in acqua.Il DSS deve avere un basso peso molecolare affinché questo modello sia efficace; preparare una quantità sufficiente di soluzione di DSS per riempire una bottiglia d'acqua per ogni gabbia di topi e filtrare la soluzione con un filtro in acetato di cellulosa da 0,45 micrometri. Sostituire la bottiglia dell'acqua da bere nella gabbia dei topi con una bottiglia contenente soluzione di DSS al 3%. Se l'istituto utilizza un sistema automatizzato di somministrazione dell'acqua, applicare apposite punte di esclusione agli erogatori per garantire che i topi non abbiano accesso ad alcuna altra fonte di acqua.Dopo quattro giorni, i topi vengono pesati nuovamente per quantificare le conseguenze sistemiche della colite. La perdita di peso è comune in caso di lesioni gravi, tuttavia potrebbe non essere evidente per diversi giorni a partire dallo stesso giorno. Al giorno quattro, sostituire la soluzione di DSS con acqua per altri tre giorni, in modo da consentire un certo recupero dell'epitelio colico.Tre giorni dopo, al settimo giorno, i topi vengono pesati nuovamente. Il colon può quindi essere prelevato dai topi sacrificati come mostrato nella sezione successiva. Per prelevare il colon, esporre la faccia ventrale del topo sacrificato per garantire un accesso ininterrotto all'addome.Inumidire completamente l'addome con etanolo al 70%. Afferrare la linea mediana dell'addome con pinze per tessuti e sollevarla. In questo modo, sollevare la cute utilizzando forbici a punta fine.Incidi l'addome per esporre il contenuto addominale. Estendi l'incisione fino all'apice del processo xifode al livello della linea mediana, quindi continua lungo la porzione inferiore dei margini costali bilateralmente. Identifica l'intestino tenue, il ceco e il colon.Dissezionare con attenzione o staccare il colon dal mesentere circostante. Successivamente, trassecare il colon in profondità verso il bacino per liberare il colon distale dal retto.Occorre fare attenzione a non recidere arterie o vene. Inoltre, si tenga presente che il colon può lacerarsi facilmente. Pertanto, rimuovere delicatamente il colon dal mesentere.Sezionare il colon al margine di sequela colona per liberare il colon prossimale. Rimuovere il colon e, utilizzando un ago da alimentazione da 20 gauge e una siringa da 10 millilitri, intubare e lavare il colon con PBS freddo ghiacciato fino a quando l'EIT risulti completamente privo di materiale fecale. È importante mantenere l'orientamento corretto del colon tenendo l'estremità distale del colon più vicina a voi.Cominciare misurando la lunghezza del colon mediante un calibro digitale. La lunghezza del colon è un altro indicatore della gravità della lesione. La colite aumenta l'edema e riduce la lunghezza complessiva del colon.A questo punto, i colon prelevati possono essere processati come salsicce per l'analisi macroscopica oppure trasformati in rotoli svizzeri per l'analisi istologica della colite acuta. Illustreremo queste tecniche nelle sezioni seguenti per processare il colon come una salsiccia. Per l'analisi macroscopica dell'intero colon, è importante mantenere l'orientamento corretto del colon. Pertanto, mantenere l'estremità distale del colon più vicina a voi.Tagliare due pezzi di sutura non assorbibile, uno di circa un pollice di lunghezza e l'altro di due pollici. Utilizzare il pezzo di sutura da due pollici per legare l'estremit&agrave; distale del colon il pi&ugrave; vicino possibile al margine, garantendo comunque una buona tenuta. Successivamente, inserire un ago da alimentazione da 20 gauge contenente cinque millilitri di formalina fosfato tamponata al 10% nell'estremit&agrave; prossimale del colon.Legare in modo lento il pezzo rimanente di sutura immediatamente prossimale alla bulbo dell'ago di alimentazione. A questo punto afferrare saldamente il colon al livello del bulbo dell'ago di alimentazione e infondere una quantità sufficiente di formalina, assicurandosi che il colon si espanda. Stringere il nodo della sutura mentre si ritira l'ago di alimentazione, lasciando così il colon infuso completamente espanso.Come procedura a salsiccia, riempire una provetta conica da 15 millilitri con formalina al 10% tamponata con fosfato ed etichettare la provetta. Posizionare il colon nella provetta e fissare per 24 ore. Dopo 24 ore, versare la formalina in un contenitore adeguato per rifiuti e sostituirla con etanolo al 70% per ulteriori 24 ore.I colon possono essere conservati in etanolo al 70% indefinitamente a temperatura ambiente. Quando si è pronti per analizzare il colon, rimuoverlo dal tubo conico. Tagliare i lacci ad ogni estremità con un bisturi, avendo cura di non danneggiare il colon.Ricordare che l'estremità distale presenta il pezzo di stringa più lungo. Tagliare il colon longitudinalmente dall'estremità distale a quella prossimale in modo che formi un'ampia lamina. Il colon può ora essere osservato al microscopio stereoscopico.Tagliare longitudinalmente il colon e dispiegarlo come una lamina piatta. Arrotolare il colon richiede due paia di pinze e una tecnica a due mani. Afferrare entrambi i margini laterali del bordo distale del colon con le pinze e procedere arrotolando il colon in modo sequenziale, ruotando e rilasciando le pinze man mano che si avanza verso il margine prossimale, generando così una spirale tridimensionale o un rotolo alla svizzera.Se il colon aderisce alla carta Watman, inumidire la carta e il colon con una piccola quantità di PBS per mantenerne la forma. Afferrare saldamente l'ansa con pinzette e sezionarla con un ago da 27 e mezzo di calibro. Fissare l'ansa piegando l'ago mentre esce dall'ansa.Ora, posizionare l'arrotolamento in una cassetta per tessuti etichettata e inserire la cassetta in un barattolo contenente formalina fosfato tamponata al 10%. Lasciare a temperatura ambiente per 24 ore per fissare il tessuto. Dopo 24 ore, versare via la formalina e sostituirla con etanolo al 70% per un periodo aggiuntivo di quattro ore.I colon possono essere conservati in etanolo al 70% indefinitamente a temperatura ambiente. Questo modello consente al ricercatore di ottenere, fissare e analizzare i colon, permettendo così l'analisi della gravità della colite. Per l'analisi macroscopica dell'intero colon, il colon può essere processato come un salsicciotto che viene infuso con formalina ed espanso completamente.La sezione aperta del salsicciotto deve essere appiattita. Se il metodo del salsicciotto è stato eseguito correttamente, il colon fissato sarà dilatato e l'intera superficie mucosa potrà essere facilmente manipolata e osservata al microscopio stereoscopico. Per l'analisi istologica, il colon può essere processato come un rotolino svizzero.Il rotolo viene fissato con un ago e collocato in una cassetta per tessuti per la fissazione. Quando il rotolo viene tagliato e montato, dovrebbe formare una sezione rappresentativa dell'intero colone se arrotolato correttamente; le sezioni del rotolo svizzero possono essere colorate con ematina e ASIN per determinare l'entità del danno colico. Ricordare che l'estremità distale del colon si trova al centro del rotolo sul vetrino.In questo esempio, l'infiammazione e il danno criptico sono evidenti nel colon trattato con DSS rispetto a un controllo trattato con acqua. Vi abbiamo appena mostrato come raccogliere ed elaborare i colon da un modello murino di colite acuta. Quando si esegue questa procedura, è importante essere ben organizzati prima dell'eutanasia.I topi, ad esempio, devono avere tutti i tubi e le cassettes etichettati per ciascun topo e tutti gli strumenti e i reagenti prontamente disponibili. Inoltre, conservare registri dettagliati del peso corporeo e della lunghezza del colon dei topi. Infine, assicurarsi di aver previsto tempo sufficiente per l'elaborazione.Di solito richiede 15 minuti per topo per un principiante e da sei a otto minuti per una persona più esperta in questa tecnica.

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Modelli sperimentali di malattia infiammatoria intestinale, ci hanno permesso di esaminare il complesso di risposte innate e adattative immunitario associate con patogenesi. Utilizzando il punteggio istologico, la quantificazione di citochine pro-infiammatorie e di attività mieloperossidasi, si può cominciare a valutare queste risposte visto nella malattia infiammatoria intestinale.

Indagare infiammazione intestinale in DSS-indotta Modello di IBD

Dimostriamo un protocollo in cui somministrazione del azoxymethane agente genotossico (AOM) seguito da tre cicli di pro-infiammatoria agente destrano solfato di sodio (DSS) rapidamente e genera costantemente tumori del colon in topi con somiglianze morfologiche e molecolari a quelli osservati negli colite umana cancro-associata.

Modellazione Colite-Associated Cancro con azoxymethane (OMA) e sodio solfato destrano (DSS)

Questo video dimostra una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da sostanze chimiche, una malattia infiammatoria intestinale. Al topo è consentito consumare una soluzione di destrano solfato di sodio (DSS) per una durata adeguata. Dopo il consumo, il DSS danneggia il muco e la barriera dello strato epiteliale nel colon, consentendo ai microbi intestinali di entrare nel tessuto sottostante, dove vengono percepiti dalle cellule immunitarie residenti per mediare una risposta...

Una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da destrano solfato di sodio

Questo video dimostra il metodo di colorazione con ematossilina ed eosina (H&amp;E) per valutare il danno al colon in un modello murino di colite indotta da DSS, una malattia infiammatoria intestinale. Dopo aver isolato il colon da un topo trattato con DSS e aver ottenuto sezioni del tessuto, la colorazione H&amp;E delle sezioni aiuta a identificare il danno tissutale mediato dall'infiammazione.

Colorazione con ematossilina ed eosina per valutare il danno al colon nella colite indotta da DSS

DNBS / TNBS colite indotta offre un metodo alternativo e poco costoso per studiare la pathobiology delle malattie infiammatorie intestinali. Il protocollo descritto in questo documento delinea l'applicazione di successo di DNBS per indurre colite in topi e ratti e permette di studiare a fondo le risposte intestinale ospite-mediata.

DNBS / TNBS Colite Modelli: Fornire Insights Into malattia infiammatoria intestinale e gli effetti di grassi

Murino colostomia distale fornisce un modello murino per colite di diversione umana, una colite linfocitaria prevalentemente nel segmento del colon escluso dal flusso fecale.

Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6

Mancanza di standardizzazione per la processazione dei tessuti murini riduce la qualità delle analisi istopatologica murino rispetto agli esemplari umani. Qui, presentiamo un protocollo per eseguire l'esame istopatologico di murini tessuti infiammati e uninflamed colici a dimostrare la fattibilità di sistemi robotici abitualmente utilizzati per l'elaborazione e l'incorporamento di campioni umani.

Utilizzo di sistemi robotici per elaborare e incorporare colici murini campioni per le analisi istologiche

Il protocollo presentato descrive una facile rimozione chirurgica dell'appendice (patch caecale) in un topo seguita dall'induzione del cancro colorettale associato alla malattia intestinale infiammatoria. Questo modello di appendicosa murina consente lo studio del ruolo biologico dell'appendice nella patogenesi della malattia gastrointestinale umana.

Murine Appendectomy Modello di Cronica Colite Associata Cancro Colorettale da Localizzazione precisa di Patch Caecal

Il punteggio sistematico dell'infiammazione intestinale utilizzando un sistema assistito da computer gratuito è un potente strumento per confrontare quantitativamente i cambiamenti istopatologici nei modelli di colite caratterizzati dalla presenza di ulcere e cambiamenti infiammatori. La valutazione del punteggio della colite istologica rafforza le osservazioni cliniche e facilita l'interpretazione dei dati.

Analisi sistematica del punteggio per l'infiammazione intestinale in un modello di colite indotta da solfato di sodio di Murine

Charles Taylor e John Marshall spiegare l'utilità dei modelli matematici per valutare l'efficacia della strategia di popolazione sostituzione. Insight è data sul modo in cui i modelli computazionali in grado di fornire informazioni sulla dinamica della popolazione di zanzare e la diffusione di elementi trasponibili per A. sottospecie gambiae. Le considerazioni etiche di rilasciare le zanzare geneticamente modificate in libertà sono discussi.

Predire l&#39;efficacia della strategia Popolazione sostituzione Utilizzando Modelli Matematici

Impara a indurre colite acuta nei topi utilizzando destrano sodio solfato (DSS) nel modello murino. Questo protocollo standardizzato include somministrazione, monitoraggio e preparazione istologica del colon per studiare le malattie infiammatorie intestinali.

Colite Modeling murino utilizzando destrano sodio solfato (DSS)

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