Name: Isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Impara l'isolamento di cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) per studi di biologia vascolare e angiogenesi. Questo protocollo utilizza collagenasi e soluzioni bilanciate per ottenere cellule vitali.

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Procedura <ol><li> Posare il cavo sul pad pulito e fuori tamponare il sangue in eccesso. Effettuare tagli freschi su entrambe le estremità del cavo. </li><li> Inserire 21 1 / 2 aghi G con la guaina di plastica ago ON, nella vena. (La vena è la più grande apertura, i 2 più piccoli sono arterie) </li><li> Morsetto l&#39;ago in posizione con un hemostat e collegare la siringa 20cc di Hanks all&#39;ago. </li><li> Spingere il Hanks attraverso la vena con una pressione moderata. Raccogliere i rifiuti nel bicchiere con la candeggina. (Tenendo l&#39;ago e il cavo con una mano mentre si spinge impedirebbe l&#39;ago saltar fuori della vena.) Se c&#39;è un sacco di sangue in vena, lavare una seconda volta. </li><li> Posare il cavo sul pad e pinza l&#39;altra estremità della vena. Riempire con alcuni ml di Hanks per controllare eventuali perdite lungo il cavo. Ritirare i 5 ml e scollegare il morsetto in basso. </li><li> Staccare la siringa 20cc. Togliere lo stantuffo dalla siringa 10cc. Collegare l&#39;ago di siringa 10cc, versare 10 ml collagenasi e sostituire pistone. Spingere collagenasi in vena fino a vedere l&#39;ammontare prima uscita l&#39;estremità aperta. Re-clamp l&#39;estremità aperta e riempire con collagenasi finché non ci sarà moderata distensione della vena. Risultati distensione troppo contaminazione muscolatura liscia. </li><li> Massaggiare delicatamente il cavo. </li><li> Cavo di incubare (con hemostats, aghi e siringhe in allegato) in DPBS a 37 ° C per 15 minuti. </li><li> Durante l&#39;incubazione, continuano le operazioni 1-8 con 2 ° cavo. </li><li> Dopo l&#39;incubazione, prendere il cavo di coppa e tenendo il cavo sul tubo 50mL tagliare l&#39;estremità sopra il morsetto in basso. Assicuratevi di raccogliere tutto il tubo. Spingere la collagenasi rimanenti attraverso il cavo, quindi collegare la siringa 20cc e spingere attraverso Hanks con una pressione moderata. </li><li> Se non le cellule muscolari lisce sono necessari, eliminare il cavo in questo momento. In caso contrario, inserire il cavo stesso in una seconda 50mL tubo con collagenasi ~ 5 ml ed incubare a 37 ° C per 30-60 minuti. </li><li> Tenere il tubo fino a quando tutti i cavi sono fatti. </li><li> Spin tubi a ~ 1200 rpm per 5 min. </li><li> Aspirare il surnatante (tranne che per ~ 1-2 ml). Risospendere il pellet in 5mls PHEC + e piastra in un T25. </li><li> Incubare a 37 ° C con 5% di CO 2 durante la notte. </li><li> Il giorno dopo togliere il surnatante e sostituirlo con mezzi freschi. Se ci sono molti globuli rossi, lavare una volta con M199, quindi aggiungere + PHEC. Continua l&#39;incubazione, come al solito fino a quando la piastra è confluente (1-4 giorni). Suddiviso in gelatinizzati T75. </li><li> Una volta T75 è confluente, diviso in tre T75s. Congelare due fiale per ogni pallone. </li></ol> Nota: le cellule endoteliali (disattivo) hanno un aspetto acciottolato. Le cellule endoteliali sono a volte attivati ​​(lungo e appuntito) subito dopo l&#39;isolamento, dopo un paio di passaggi che di solito ritornare in uno stato non attive. Pulizia <ol><li> Con molta attenzione, smaltire in un contenitore di aghi acuminati. </li><li> Smaltire le siringhe in grandi contenitori a rischio biologico. </li><li> Mettere tutto il tessuto in piccoli sacchetto. Borsa stretta e congelare a -20 ° fino a quando l&#39;incenerimento. </li><li> Immergere tutti gli strumenti in virucida per almeno 10 min. </li><li> Aggiungi mezzi di incubazione di rifiuti / candeggina bicchiere. Lasciate riposare per almeno 10 min. </li><li> Eliminare il pad in panchina rifiuti biologici. </li><li> Spruzzare verso il basso all&#39;interno e all&#39;esterno di bicchieri, da banco e il coperchio bagnomaria con vircide. Lasciate riposare 10 minuti, quindi pulire. </li><li> Lavare bicchieri e gli strumenti con acqua calda e appendere ad asciugare su rack (macchia fuori gli strumenti in modo che non ruggine). </li><li> Smaltire i rifiuti decontaminati nel lavandino. </li><li> Ritorna supporti non utilizzati per frigorifero. </li><li> Smaltire i guanti in rifiuti biologici. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Collagenasi 0,1%</td><td></td><td></td><td>10 mL per cordone, riscaldati a 37 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>Flaconi per colture cellulari</td><td></td><td></td><td>T75, uno per cordone.</td></tr><tr><td>Mezzo di Hank</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>forbici</td><td></td><td></td><td>sterili</td></tr><tr><td>bicchiere</td><td></td><td></td><td>sterile</td></tr><tr><td>tubi da 50 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (huvec)

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

L&#39;angiogenesi è un complesso processo multi-step, in cui in risposta a stimoli angiogenici, vengono creati nuovi vasi da vasi esistenti. Questi passaggi sono: la degradazione della membrana basale, la proliferazione e la migrazione (germogliamento) delle cellule endoteliali (CE) nella matrice extracellulare, l&#39;allineamento della CE in corde, formazione lumen, anastomosi, e la formazione di una nuova membrana basale. Molti test in vitro sono stati sviluppati per studiare questo processo, ma la maggior parte solo mimare alcune fasi dell&#39;angiogenesi, e morfologicamente i vasi spesso non assomigliano vasi in vivo. Qui mostriamo uno ottimizzato test in vitro che utilizza l&#39;angiogenesi umano vena ombelicale CE e fibroblasti. Questo modello racchiude in sintesi tutte le fasi iniziali della chiave dell&#39;angiogenesi, e soprattutto i vasi visualizzazione lumen brevetto intercellulare circondato da polarizzata CE. Le navi possono essere facilmente osservati in contrasto di fase e microscopia time-lapse, e recuperato in forma pura per applicazioni a valle.

Questo protocollo video illustra l&#39;isolamento e la coltura di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC) da cordone ombelicale umano. Una volta isolato queste cellule possono essere utilizzati per test in vitro angiogenesi come il saggio Ottimizzato fibrina Gel Bead dimostrata anche dal laboratorio di Hughes.

Isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC)

L'angiogenesi è un complesso processo multistadio in cui, in risposta a stimoli angiogenici, nuovi vasi vengono creati a partire dalla vascolarizzazione esistente. Questi passaggi...

Ciao, mi chiamo Jager Davis e oggi vi mostrerò come isolare le cellule endoteliali della vena ombelicale umana, note anche come ic. Utilizzeremo diversi mezzi, partendo dalla soluzione salina equilibrata di Hank, che servirà a pulire le nostre cellule da globuli rossi o altre contaminazioni presenti nella vena. In secondo luogo, useremo la collagenasi risospesa in DPBS, una soluzione che verrà impiegata per staccare le ubic dalla vena; quindi le semineremo in un mezzo con effetto al 20%, costituito da M1 99 arricchito con FBS attivato termicamente e soluzione pen stripp.Aggiungeremo anche un integratore per la crescita delle cellule endoteliali della BD Biosciences alla nostra sospensione Resus. Bene, ho un paio di forbici da dissezione. Eseguirò un taglio dritto attraverso il cordone in questo modo.Successivamente, procederò a pulire il cordone. Quindi, identificherò le arterie e la vena. Ci sono due arterie e una vena.Di solito identifico le arterie a due a due. Escono verso di voi. Quindi ne abbiamo una proprio qui e un'altra arteria proprio qui.E come puoi vedere, la vena entra effettivamente nel cordone, ed è proprio qui che posizioneremo il nostro ago a farfalla. Stiamo utili

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Il cordone ombelicale sono utilizzate per isolare le cellule muscolari lisce per vie diverse. In questo lavoro abbiamo usato il trattamento enzimatico per isolato cellule muscolari lisce.

Isolamento di cellule umane ombelicale muscolatura liscia arteriosa (HUASMC)

Forniamo un metodo per isolare e popolazioni coltura pura di cellule endoteliali valvola cardiaca (VEC). VEC può essere isolato da entrambi i lati della cuspide o depliant e subito dopo, alla base di cellule interstiziali (VIC) isolamento è semplice.

Isolamento di cellule endoteliali valvolare

Questo articolo descrive prima di una procedura per isolare cellule endoteliali umane da vena ombelicale e poi mostra come utilizzare queste cellule per esaminare la trasmigrazione dei neutrofili in condizioni di flusso. Utilizzando un basso volume camera di flusso realizzati da un polimero con le caratteristiche ottiche di vetro, live-cellula imaging a fluorescenza di popolazioni di cellule rare è anche possibile.

Isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale e il loro uso nello studio della trasmigrazione dei neutrofili in condizioni di flusso

È riportato un metodo di quantificazione neutrofili. Questo metodo crea un ambiente di flusso dinamico simile a quello riscontrato in un vaso sanguigno. Permette la ricerca di neutrofili adesione a entrambi le molecole purificate di adesione (ligando) o substrato di cellule endoteliali (HUVEC) in un contesto simile all'ambiente in vivo con lo stress puro.

Umano camera di flusso neutrofili saggio

Questo protocollo è preparato per condividere il nostro metodo di isolamento delle cellule endoteliali coronariche di topo a scopo di imaging o per condurre esperimenti di biologia molecolare.

Isolamento di cellule di topo coronarica endoteliali

Protocolli per la coltura di cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC), la trasfezione transitoria di marcatori marcati in fluorescenza della crescita dei microtubuli, l'imaging di cellule vive e l'analisi automatizzata delle dinamiche di crescita dei microtubuli interfasici.

Ad alta risoluzione Time-lapse imaging e analisi automatizzata dei microtubuli Dynamics in Living ombelicale umano cellule endoteliali Vena

L'obiettivo del presente protocollo è quello di isolare le cellule progenitrici endoteliali da sangue del cordone ombelicale. Alcune delle applicazioni includono l'utilizzo di queste cellule come biomarcatore per identificare i pazienti con rischio cardiovascolare, trattamento delle malattie ischemiche, e costrutti di creazione valvola vascolare e cuore tessutale.

Isolamento di cellule endoteliali progenitrici dal sangue del cordone ombelicale umano

Qui, presentiamo un protocollo integrato che misura sottopopolazione del monocito traffico sotto flusso in vitro mediante uso di specifici marcatori di superficie e microscopia a fluorescenza confocale. Questo protocollo consente di esplorare reclutamento sequenziale passaggi anche per quanto riguarda il profilo di altri sottotipi del leucocita utilizzando altri specifici marcatori di superficie.

Studio simultaneo del reclutamento di sottopopolazioni monocito sotto flusso In Vitro

Sebbene impegnativo, l'isolamento delle cellule endoteliali polmonari è essenziale per gli studi sull'infiammazione polmonare. Il presente protocollo descrive una procedura per l'isolamento ad alto rendimento e ad alta purezza delle cellule endoteliali macrovascolari e microvascolari.

Isolamento e purificazione delle cellule endoteliali microvascolari e macrovascolari da campioni derivati dai polmoni

L'attuale studio descrive un protocollo per monitorare i cambiamenti nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) durante l'infezione virale utilizzando un sistema di analisi cellulare in tempo reale (RTCA).

Monitoraggio dei cambiamenti nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana in seguito a infezione virale utilizzando l'analisi cellulare in tempo reale basata sull'impedenza

Descriviamo un protocollo per isolare e coltivare cellule endoteliali della vena safena umana (hSVEC). Forniamo anche metodi dettagliati per produrre stress di taglio e allungamento per studiare lo stress meccanico nelle hSVEC.

Vena safena umana Isolamento delle cellule endoteliali ed esposizione a livelli controllati di stress da taglio e allungamento

Impara l'isolamento di cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC) per studi di biologia vascolare e angiogenesi. Questo protocollo utilizza collagenasi e soluzioni bilanciate per ottenere cellule vitali.

Isolamento di cellule umane endoteliali della vena ombelicale (HUVEC)

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