Name: Bioluminescent modello murino epatica Tumori (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: Impara una tecnica chirurgica per indurre tumori epatici bioluminescenti ortotopici nel topo. Questo modello murino consente il monitoraggio non invasivo della crescita tumorale mediante imaging in vivo.

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Questo lavoro è stato finanziato attraverso il Cork Sud Infermeria fondo Victoria University Hospital con il seno, il Cancer Society irlandese (CRI07TAN) e il Cancer Centre Cork Research. Linea del polmone Lewis cellule che esprimono stabilmente luciferasi è stato un gentile dono del Dr. Karin Jooss, Cell Genesys, Inc., San Francisco, USA.

Introduzione Il fegato è spesso il primo sito di malattia metastatica e può essere l'unico sito di diffusione in circa il 30 40% dei pazienti con malattia avanzata. Tuttavia le opzioni per il trattamento di tumori epatici metastatici sono pochi con una minoranza di pazienti idonei per la resezione e solo il 23% responder importante per chemioterapici. Ricerca pre-clinica in questo campo è stata limitata dall'assenza di un modello murino adatto per studiare le malattie del fegato isolato. Descriviamo uno split-milza approccio che può essere usato per stabilire in modo sicuro uniforme, metastasi epatiche diffuse. Resezione di questa metà della milza evita le conseguenze della crescita del tumore della milza e l'altra metà della milza viene restituito con una circolazione portale per mantenere intatto splenica proprietà immunitarie protettive. Il modello che abbiamo descritto è abbastanza semplice da eseguire e può essere effettuata rapidamente attraverso una singola incisione. Le proprietà bioluminescenti della linea di cellule tumorali consente la quantificazione accurata della risposta al trattamento senza sacrificio di animali. Protocollo I. Preparazione cellulare <ol><li> Lewis cellule di carcinoma del polmone sono cresciuti mezzo modificato Essential Dulbecco supplementato con 10% siero di vitello fetale a 37 ° C, 5% di CO 2 e raccolte trypsinisation quando sub-confluenti. </li><li> Le cellule sono state contate utilizzando un NucleoCounter (chemio-metec, Danimarca) e una sospensione singola cella di 1 x 10 6 cellule in 200 microlitri è stato preparato nel siero media liberi. </li></ol> II. Preparazione del mouse Nota: Tutte le procedure sono state approvate dal comitato etico della University College Cork. Nel nostro laboratorio usiamo anestetici iniettabili per anestetizzare il mouse, in alternativa, si può usare anestetici inalatori per ottenere lo stesso effetto. Il ceppo di topi che abbiamo usato è il glabro MF1 nu / nu ceppo ottenuti da laboratori di Harlan (Oxfordshire, Inghilterra). Femmina MF1 nu / nu topi pesa 16-22 grammi e di 6-8 settimane di età sono stati inclusi in questo esperimento. Altri ceppi, come la C57 e Balb / c può essere utilizzato anche con le linee appropriato delle cellule tumorali. <ol><li> L'anestesia è stata consegnata mediante iniezione intraperitoneale di 100ul di 1,5 mg di ketamina e 300 xylazina ug. </li><li> La profondità di anestesia viene valutata usando un pizzico piedi. Non ci dovrebbero essere riflesso ritiro con pizzico punta. </li><li> Il mouse è posizionato correttamente anestetizzato e registrato su una piastra elettrica. </li><li> L'addome viene preparato con una soluzione di Betadine al 10%. </li><li> Dell'addome e del sito chirurgico sono drappeggiati in modo sterile. </li></ol> III. Incisione addominale <ol><li> Una piccola incisione sottocostale è realizzata in pelle. </li><li> L'incisione è estesa a 2-3 cm. </li><li> La muscolatura della parete addominale sono stati divisi e la cavità peritoneale è entrato. </li></ol> IV. L'esposizione e la Divisione di Milza <ol><li> La milza è mobilitato e delicatamente esteriorizzata in un pre-tagliati garza sterile. </li><li> Due legature Vicryl 4-0 sono legate intorno al corpo a metà della milza. </li><li> Milza è diviso tra le due legature creando due emi-milza. </li></ol> V. iniezione di cellule nel Hemi-milza <ol><li> A 27 G è usato per iniettare un volume di 100 l di cellule in un semi-milza. </li><li> Le cellule tumorali sono autorizzati a drenare il fegato per dieci minuti fornendo un tempo sufficiente per la maggior parte delle cellule iniettate per raggiungere il fegato. </li></ol> VI. Asportazione di milza-Hemi, la chiusura addominale e recupero <ol><li> Il iniettato emi-milza è escisse. </li><li> L'altro emi-milza viene restituito alla cavità addominale. </li><li> Lo strato muscolare è chiuso con 4-0 sutura PDS utilizzando un punto semplice esecuzione. </li><li> La pelle dell'addome è chiusa con Prolene 4-0 con punti di sutura interrotta. </li><li> Liquido viene somministrato in bolo e analgesia post-operatoria, Carpofen (5 mg / kg) viene somministrato mediante iniezione IP per 24 ore dopo l'intervento chirurgico. </li><li> Il mouse è permesso di recuperare da anestesia </li></ol> VII. IVIS tutto il corpo Bioluminescent Imaging <ol><li> Mouse è anestetizzato con iniettabili anestetico. </li><li> Substrato luciferina è dato da iniezione intra-peritoneale dieci minuti prima di imaging </li><li> I topi sono immessi sul palco e ripreso per 3 minuti utilizzando IVIS intero sistema di imaging del corpo </li><li> Luminescenza dal fegato può essere misurato utilizzando una regione di strumento di interesse </li></ol> VIII. Esposizione di fegato di topo <ol><li> Mouse è anestetizzato con iniettabili anestetico. </li><li> Un tetto incisione addominale permette la visualizzazione di metastasi epatiche diffuse in vivo. </li><li> Il mouse è eutanasia da dislocazione del collo dell'utero e del fegato può essere asportato per ulteriori analisi. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "alt =" Figura 1 "/&gt; Figura 1. Fresco non trattato asportato murini e tumore fegato infiltrato. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Cinetica di crescita del tumore epatico come dimostra l'imaging IVIS corpo intero.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Lo sviluppo di affidabili modelli in vivo per lo studio delle metastasi al fegato sta diventando sempre più importante con l&#39;avvento di nuove strategie terapeutiche. Per lo studio accurato di nuove strategie, modelli animali dovrebbe essere relativamente facile da eseguire, formare un numero significativo di metastasi, coinvolgere tutte le fasi della cascata metastatica e hanno un sistema giornalista che consente il rilevamento e il conteggio di un numero limitato di cellule metastatiche. Split-milza approc...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Chetamina</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofene</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Videne</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura Vicryl 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura PDS 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura Prolene 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luciferina Firefly</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bioluminescent modello murino epatica tumori

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Questo video descrive la creazione di metastasi del fegato in un modello murino che può essere successivamente analizzato da immagini bioluminescenti. Le cellule tumorali vengono somministrati appositamente per il fegato per indurre un tumore localizzato al fegato, attraverso la mobilitazione della milza e la divisione in due, lasciando intatto il peduncolo vascolare per ogni metà della milza. Lewis cellule di carcinoma del polmone che esprimono costitutivamente il gene della luciferasi lucciola (luc1) vengono inoculati in un emi-milza che viene poi asportato dopo 10 minuti. L&#39;altro emi-milza viene lasciato integro e restituito all&#39;addome. La crescita del tumore del fegato può essere monitorato l&#39;imaging bioluminescenza utilizzando l&#39;intero IVIS sistema di imaging del corpo. L&#39;imaging quantitativo della crescita tumorale mediante IVIS fornisce quantificazione precisa delle cellule tumorali vitali. La morte delle cellule tumorali e la necrosi a causa di un trattamento farmacologico è indicato all&#39;inizio di una riduzione del segnale bioluminescente. Questo modello del mouse permette di indagare i meccanismi alla base del tumore metastatico delle cellule di sopravvivenza e di crescita e può essere utilizzato per la valutazione delle terapie delle metastasi epatiche.

Questo articolo descrive una procedura per l&#39;induzione di tumori al fegato ortotopico bioluminescenti nei topi, e la successiva analisi di crescita del tumore confinato al fegato utilizzando vivere tutto l&#39;imaging luminescenza corpo.

Bioluminescent modello murino epatica Tumori

Questo video descrive l'induzione di metastasi epatiche in un modello murino che può essere successivamente analizzato tramite imaging bioluminescente. Le cellule tumorali sono...

Ciao a tutti. Mi chiamo Simon Regenron. Sono uno degli specializzandi in chirurgia presso il centro di ricerca sul cancro al fegato qui in Irlanda.Oggi vi mostrerò una tecnica chirurgica per indurre metastasi epatiche. In un modello murino, il fegato è un sito comune di diffusione metastatica e una causa importante di mortalità correlata al cancro. Solo una piccola percentuale di pazienti è idonea alla resezione chirurgica in caso di malattia epatica avanzata.Pertanto, sono necessarie nuove terapie per il trattamento di questa condizione. Molti modelli animali di metastasi epatiche non producono una malattia simile a quella riscontrata in ambito clinico. Il modello che vi mostrerò oggi è un modello clinicamente rilevante ed è relativamente facile da apprendere, con tassi di successo molto elevati.Questo modello prevede la divisione della milza in due emimilze. Un'emimilza viene utilizzata per l'inoculo delle cellule tumorali. Queste cellule tumorali viaggiano attraverso la circolazione portale fino al fegato.L'altro emisplene viene lasciato integro, mantenendone le proprietà immunologiche. La linea cellulare che sto utilizzando esprime in modo stabile la luciferasi, consentendo l'a

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Luciferasi modificati xenotrapianti di tumori al cervello umano può essere stabilita intracranially in topi atimici, con successivo monitoraggio della crescita tumorale e la risposta alla terapia con l'imaging bioluminescenza. In combinazione con l'analisi di sopravvivenza, il monitoraggio bioluminescenza è uno strumento di ricerca indispensabile per test pre-clinici di terapie che sono considerati per il trattamento dei tumori cerebrali.

Stabilire intracranica xenotrapianti Brain Tumor Con successiva analisi della crescita tumorale e risposta alla terapia con Imaging bioluminescenza

L'imaging bioluminescenza di ipossia-inducibile fattore 1α attività è applicata a monitorare lo sviluppo del tumore ipossia cerebrale in un modello di cancro al seno del mouse metastasi al cervello.

In Imaging bioluminescenza in vivo di Dinamica Tumore ipossia di metastasi cerebrali cancro al seno in un modello murino

Questo video mostra un modello ortotopico di cancro al pancreas che utilizza Matrigel per la somministrazione di cellule localizzate e l'imaging a bioluminescenza in vivo per il monitoraggio non invasivo della progressione del tumore. Il modello ortotopico è adatto sia a modelli singenici che a xenotrapianti e potrebbe essere utilizzato in studi preclinici per studiare l'impatto di nuove terapie antitumorali sulla crescita del tumore pancreatico primario e sulle metastasi.

Modello murino di carcinoma pancreatico ortotopico bioluminescente: una tecnica non invasiva per monitorare la progressione del cancro nei topi

Fonte:Marina Arantes Radicchi1, Victor Carlos Mello1,Victória Paz Machado1, Márcia Cristina Oliveira da Rocha1, Jaqueline Vaz de Oliveira1, Luana Cristina Camargo1,2, Luís Alexandre Muehlmann1, Ricardo Bentes Azevedo1, Sônia Nair Bao1, João Paulo Figueiró Longo11Istituto di Scienze Biologiche, Università di Brasilia, 2Dipartimento di Processi Psicologici di Base, Istituto di Psicologia, Università di BrasiliaQuesto video mostra la procedura per monitorare la progressione del tumore in vivo...

Imaging bioluminescente della progressione del tumore al seno in un modello murino femmina

Fonte: Clark, A.J., et al. Imaging a bioluminescenza di un modello animale immunocompetente per il glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra l'imaging a bioluminescenza per monitorare la progressione del glioblastoma in un modello murino immunocompetente, utilizzando cellule tumorali che esprimono luciferasi e luciferina per quantificare la crescita tumorale in modo non invasivo.

Imaging a bioluminescenza di un modello murino immunocompetente per il glioblastoma

Migliore comprensione della biologia del cancro pancreatico è criticamente necessaria per consentire lo sviluppo di migliori opzioni terapeutiche per il trattamento di cancro al pancreas. Per rispondere a questa esigenza, abbiamo dimostrato un modello ortotopico di cancro al pancreas, che consente il monitoraggio non invasivo di progressione del cancro...

Bioluminescente modello ortotopico di cancro al pancreas Progressione

GL261 le cellule di glioma forniscono un utile modello animale immunocompetente di glioblastoma. Gli obiettivi di questo protocollo sono dimostrare tecniche adeguate per il monitoraggio della crescita tumorale intracranica utilizzando l'imaging in bioluminescenza in vivo e verificare l'utilità delle cellule GL261 modificate con luciferasi per lo studio dell'immunologia tumorale e degli approcci immunoterapeutici per il trattamento del glioblastoma.

Bioluminescenza Imaging di un Modello immunocompetenti Animal Glioblastoma

l'imaging bioluminescenza è uno strumento ben noto per la localizzazione di tumori e metastasi, ma la quantificazione di queste immagini spesso richiede calcoli complessi e particolari strumenti. Descriviamo il metodo luminoscore da usare facile, in base alle condizioni di acquisizione precise, che non richiede calcoli e permette il carico tumorale e della risposta al trattamento da monitorare in modelli murini.

Bioluminescenza-Based Metodo Tumore quantificazione per il monitoraggio del tumore Progressione e gli effetti del trattamento in modelli murini linfoma

La capacità dei cloni metastatici di colonizzare siti distanti dipende dalla loro capacità di proliferazione e/o dalla loro capacità di sopravvivere nel microambiente ospite senza una proliferazione significativa. Qui, presentiamo un modello animale che consente la visualizzazione quantitativa di entrambi i tipi di colonizzazione del fegato da parte di cloni metastatici.

Avanzato modello animale di colorettale Metastasi nel fegato: tecniche di imaging e di proprietà di metastatici cloni

Vi presentiamo un modello murino ortotopico di cancro del seno e mastectomia radicale modello con tecnologia di bioluminescenza per quantificare il carico del tumore per simulare la progressione del cancro al seno umano.

Generazione di un modello di cancro al seno metastatico murino ortotopico ed eseguendo murino mastectomia radicale

Una delle principali sfide nello sviluppo di nuove terapie per il cancro del polmone include la modellazione del microambiente tumorale man mano che la malattia regionale progredisce verso la malattia metastatica. Qui, descriviamo un metodo semplice per stabilire un modello singenico ortotopico del cancro del polmone che consente il monitoraggio in vivo della malattia nel tempo.

Un metodo minimamente invasivo per la generazione di un modello murino ortotopico singenico di carcinoma polmonare

Impara una tecnica chirurgica per indurre tumori epatici bioluminescenti ortotopici nel topo. Questo modello murino consente il monitoraggio non invasivo della crescita tumorale mediante imaging in vivo.

Bioluminescent modello murino epatica Tumori

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