JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 visualizzazioni • 2:53 min • April 30th, 2023
-Per accedere alla pupa in via di sviluppo, rimuovere il pupario dopo che l'epitelio pupale si è separato dalla cuticola o dopo lo stadio pupale P5. Per iniziare, posiziona la pupa intatta con il lato ventrale rivolto verso di te. Usa una pinza per tenere il pupario nello spazio vuoto tra l'estremità anteriore dell'involucro e la testa della pupa. Quindi, rompi e rimuovi delicatamente il pezzo anteriore del pupario per esporre la testa.
Mantenendo l'orientamento ventrale, utilizzare la pinza per creare piccole rotture lungo l'asse antero-posteriore del pupario e assicurarsi che si formi uno spazio continuo nel processo. Fare attenzione a non danneggiare il tessuto della pupa direttamente sottostante. Quindi continua a rompere il pupario dalla fessura verso l'esterno, una porzione alla volta, e stendi l'involucro strappato nel processo. Usando un pennello bagnato fine, raccogli la pupa esposta per ulteriori indagini. Nell'esempio di protocollo, vedremo come rimuovere il pupario di Drosophila guttifera e preparare la pupa per l'imaging.
-Per iniziare la rimozione del pupario, applicare un pezzo di nastro biadesivo su un pezzo di carta assorbente. Posiziona la pupa sul nastro biadesivo, con il lato ventrale rivolto verso l'alto. Individua lo spazio tra il lato anteriore del pupario e la pupa interna. Afferrare e rimuovere il pupario attorno a questa fessura usando una pinza ed esporre il lato anteriore della testa della pupa.
Inserire la punta di una pinza spostandola parallelamente all'asse antero-posteriore. Solleva la punta della pinza per rompere localmente il pupario. Ripetere questa azione fino a quando la rottura non raggiunge la parte posteriore del pupario. Assicurati che si formi uno spazio tra il pupario e le zampe della pupa e rompi il lato ventrale del pupario riducendo al minimo i danni alla pupa interna. Dopo aver rotto il puparium il più possibile, estrai la pupa usando un pennello fine. Posizionare la pupa su un pezzo di carta velina che è stato inumidito con ddH2O e posto in una capsula di Petri di plastica. Scatta immediatamente fotografie poiché la pupa esposta è vulnerabile e si asciuga facilmente.
In questo articolo viene descritta la procedura per rimuovere il pupeio di Drosophila guttifera al fine di accedere alla pupa in via di sviluppo per l'analisi mediante imaging. Il metodo sottolinea la necessità di un'accurata manipolazione per evitare danni alla pupa durante il processo di rimozione.
L'accesso diretto a pupe di insetti integre consente l'acquisizione di immagini ad alta risoluzione e l'analisi quantitativa dei processi di sviluppo, supportando la validazione precoce degli obiettivi nella ricerca genetica e dello sviluppo. Questo metodo riduce l'ambiguità biologica preservando l'integrità dei tessuti, facilitando valutazioni fenotipiche riproducibili fondamentali per le decisioni nelle fasi di scoperta. La sua applicabilità in diverse specie di Drosophila migliora la flessibilità del portafoglio per lo sviluppo di modelli traslazionali.
Questa tecnica di rimozione della pupea si integra nell'interfaccia tra la fase iniziale di scoperta e lo sviluppo del saggio, consentendo l'acquisizione di immagini dirette e l'analisi quantitativa dei fenotipi dello sviluppo.
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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026