Rimozione del pupario degli insetti: un metodo per l'indagine sulle pupe

-Per accedere alla pupa in via di sviluppo, rimuovere il pupario dopo che l'epitelio pupale si è separato dalla cuticola o dopo lo stadio pupale P5. Per iniziare, posiziona la pupa intatta con il lato ventrale rivolto verso di te. Usa una pinza per tenere il pupario nello spazio vuoto tra l'estremità anteriore dell'involucro e la testa della pupa. Quindi, rompi e rimuovi delicatamente il pezzo anteriore del pupario per esporre la testa.

Mantenendo l'orientamento ventrale, utilizzare la pinza per creare piccole rotture lungo l'asse antero-posteriore del pupario e assicurarsi che si formi uno spazio continuo nel processo. Fare attenzione a non danneggiare il tessuto della pupa direttamente sottostante. Quindi continua a rompere il pupario dalla fessura verso l'esterno, una porzione alla volta, e stendi l'involucro strappato nel processo. Usando un pennello bagnato fine, raccogli la pupa esposta per ulteriori indagini. Nell'esempio di protocollo, vedremo come rimuovere il pupario di Drosophila guttifera e preparare la pupa per l'imaging.

-Per iniziare la rimozione del pupario, applicare un pezzo di nastro biadesivo su un pezzo di carta assorbente. Posiziona la pupa sul nastro biadesiv