Saggio di arrampicata volante: un metodo per testare la locomozione generale in Drosophila melanogaster

-In primo luogo, ottenere un determinato numero di Drosophila adulta. La camera di prova per il saggio rampicante è composta da due fiale fissate insieme. Uno di questi flaconcini deve essere contrassegnato da una linea.

Senza anestesia con anidride carbonica, che può compromettere il comportamento di arrampicata, trasferire un determinato numero di mosche nella camera di prova. Lascia che le mosche si riprendano per un periodo di tempo predeterminato. Con il lato contrassegnato della camera rivolto verso il basso, picchiettare con decisione la camera su un tappetino per mouse posizionato su una superficie solida. Questo costringerà le mosche sul fondo della camera. Il test di arrampicata sfrutta la naturale tendenza della Drosophila a salire verso l'alto contro la gravità, un comportamento chiamato geotassi negativa.

Durante la prova, i moscerini non dovrebbero essere esposti alla luce solare diretta perché i moscerini potrebbero mostrare un comportamento di fototassi o un movimento in risposta a stimoli luminosi. Registra il numero di mosche che raggiungono o superano la linea. Quindi ottieni la percentuale di superamento dividendo questo numero per il numero totale di mosche testate. Lascia che le mosche si riprendano prima di ripetere la prova. Nell'esempio, osserveremo un saggio di arrampicata su mosca utilizzato per valutare la funzione motoria di Drosophila dopo mutagenesi chimica.

-Per iniziare, raccogli mosche omozigoti da linee appartenenti alla collezione mutagenizzata ENU di mutanti di Drosophila mappati sul secondo cromosoma. Capovolgere le mosche di età compresa tra 10 e 12 giorni in una camera di prova senza anestesia, una linea alla volta, e lasciarle riprendersi per cinque minuti.

Con la linea di cinque centimetri segnata con il lato rivolto verso il basso, picchiettare con forza la camera tre volte su un tappetino per mouse posizionato su una superficie solida in modo che tutte le mosche inizino il saggio dal basso. Osservare la locomozione del volo per un periodo di 10 secondi. Registra il numero di mosche che raggiungono o superano la linea dei cinque centimetri entro questo tempo, nonché il numero totale di mosche testate. Attendere un minuto prima di iniziare una seconda prova. Ripetere un minimo di tre repliche di prova per riga.