drosofila Dissezione della ghiandola accessoria maschile: un metodo per isolare le cellule secondarie

- Sotto un microscopio da dissezione e in terreni integrati con siero, rimuovere il tratto riproduttivo da ciascun moscerino con una pinza. Innanzitutto, rimuovi le parti del tratto digestivo che potrebbero aver accompagnato il tratto riproduttivo. Per isolare le ghiandole accessorie e il dotto eiaculario, rimuovere i testicoli, il bulbo eiaculatorio e i terminali. Lavare il fazzoletto per uno o due minuti in PBS per rimuovere il siero. Quindi, trasferiscilo nella soluzione di dissociazione.

Per esporre le cellule all'interno delle ghiandole alla soluzione di dissociazione, tenere il centro di ciascuna ghiandola con una pinza e tagliare la ghiandola con un paio di pinze affilate. Rimuovere la porzione prossimale della ghiandola e il dotto eiaculatorio per lasciare dietro di sé l'estremità distale delle ghiandole contenente la rara popolazione di cellule secondarie responsabile della secrezione di proteine coinvolte nell'accoppiamento. Infine, trasferire le punte dei pressacavi accessori in una provetta da microcentrifuga in preparazione per la digestione. Nel seguente protocollo, sezioniremo le ghiandole accessorie per isolare le cellule secondarie per l'analisi del trascrittoma.

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