Dissezione del tubulo di Malpighian da una mosca adulta: isolamento di un organo osmoregolatore ed escretore

- Inizia con una mosca adulta anestetizzata in un piatto da dissezione. Tenere la mosca per il torace con una pinza e aprire l'estremità posteriore dell'addome usando un secondo paio di pinze. Poiché i moscerini adulti hanno due paia di tubuli malpighiani o MT che convergono nell'intestino attraverso gli ureteri comuni, tirare l'intestino posteriore fuori dal moscerino per rilasciare i MT. La coppia posteriore di MT verrà liberata per prima mentre si circonda dietro l'intestino. Continua a tirare l'intestino per liberare i MT anteriori e poi pizzicali all'uretere per separarli dalla mosca.

Per montare i tubuli, far scorrere un'asta di vetro sotto l'uretere e trasferire i MT su un vetrino rivestito di poli-L-lisina. Fissare gli organi sezionati premendo l'uretere verso il basso e quindi passare con cura l'asta sui MT. La poli-L-lisina sul vetrino promuoverà l'adesione aumentando il numero di siti caricati positivamente disponibili per il legame delle cellule caricate negativamente dei tubuli. Nel seguente protocollo, sezioniremo le MT di una mosca femmina adulta e le monteremo per l'imaging dal vivo ex vivo in un sistema di perfusione.

- Per iniziare questa procedura, posizionare du