Saggio dell'isola: un metodo ad alto rendimento per valutare il comportamento locomotore della Drosophila

- Il test dell'isola consiste in una piattaforma bianca rialzata in un vassoio di acqua saponata, coperto da una scatola trasparente con un lato aperto. Una telecamera sulla parte superiore della scatola registra le immagini dall'alto della piattaforma e le luci sono posizionate per garantire un'illuminazione uniforme dell'area.

Per caricare le mosche sull'arena, picchietta una fiala contro una superficie piana per portare tutte le mosche sul fondo. In rapida successione, rimuovi il tappo della fiala, capovolgi la fiala e picchietta l'estremità aperta della fiala sulla piattaforma per eliminare tutte le mosche contemporaneamente. L'atterraggio sulla piattaforma innesca una risposta di fuga. Le mosche con mobilità tipica possono liberare la piattaforma in pochi secondi, a differenza di quelle con difetti locomotori.

I soggetti sono confinati nella scatola e quelli che atterrano sull'acqua saponata si immergono rapidamente perché il sapone diminuisce la tensione superficiale dell'acqua. Per valutare il comportamento locomotore in diverse condizioni, contare le mosche rimanenti sulla piattaforma dopo un determinato periodo di tempo.

In questo protocollo di esempio, vedremo una configurazione del test dell'isola compatibile con l'analisi semi-automatica delle immagini.

- Innanzitutto, preparare un minimo di tre fiale per condizione sperimentale come repliche biologiche. Ogni fiala deve contenere circa 15 mosche dello stesso sesso e di età simile. È importante sottolineare che le mosche devono avere le ali intatte.

Crea le cartelle in cui archiviare gli esperimenti. Genera questi in una struttura di directory definita dalle condizioni e replica. Se, ad esempio, l'esperimento ha due genotipi con cinque repliche ciascuno, crea una cartella principale con la data dell'esperimento e, all'interno di quella cartella, crea una sottocartella per ogni genotipo. Quindi, all'interno delle cartelle del genotipo, creare sottocartelle per ogni replica.

Quindi, imposta l'apparato di prova. Aggiungere acqua fredda con una piccola quantità di sapone al vassoio da bagno e posizionare la piattaforma al centro della vasca, se non già fissata nella vasca. Copri il vassoio e la piattaforma con una scatola trasparente.

Per illuminare la piattaforma, posizionare sopra di essa una lampada fredda, come i normali LED da 12 volt. Inoltre, posiziona una webcam collegata a un computer direttamente sopra la piattaforma.

Sul computer, aprire il software di registrazione delle immagini. Dal sistema di menu, selezionare la webcam appropriata come dispositivo di acquisizione. Posiziona una mosca morta sull'isola per regolare le impostazioni video. Modifica la luminosità, il contrasto e il colore nel software in modo che la mosca morta appaia nera su uno sfondo bianco.

Quindi, regola l'impostazione del filmato time lapse per salvare i filmati come file AVI. Quindi, vai alla directory in cui devono essere salvati i dati e definisci il nome del film. Salvare queste modifiche.

Per la compressione dei dati dell'immagine, scegliere il codice Intel IYUV. Impostare la velocità di registrazione su un fotogramma ogni 0,1 secondi e regolare la velocità di riproduzione corrispondente su 10 immagini al secondo.

Infine, vai all'impostazione Avanzate e seleziona Crea un'immagine BNP per ogni fotogramma acquisito. Quindi, vai alla stessa directory che hai scelto per ospitare i file AVI e premi OK.

Prima di iniziare, assicurati che l'isola sia vuota e pulita. Quindi, avviare la registrazione nell'interfaccia dell'immagine time lapse del software di registrazione delle immagini.

Prendi una fiala contenente mosche e picchiettala due o tre volte per far cadere tutte le mosche sul fondo. Quindi, rimuovere rapidamente il tappo dalla fiala e picchiettare energicamente le mosche sulla piattaforma. Dovrebbero colpire tutti la piattaforma all'incirca nello stesso momento.

Dai alle mosche fino a 30 secondi per lasciare la piattaforma. Quindi, interrompi la registrazione. Se necessario, rimuovere manualmente le mosche rimanenti dalla piattaforma.

Prima di procedere con l'esperimento successivo, assicurarsi di ridefinire la directory in cui deve essere memorizzato il set di dati successivo.