Montaggio di cervelli di Drosophila adulta: un metodo per preparare vetrini per l'imaging confocale

- Su un vetrino da microscopio caricato positivamente, far aderire due vetrini coprioggetti con una distanza sufficiente tra loro per creare uno spazio per il montaggio del cervello di Drosophila. Sotto lo stereomicroscopio, pipettare i cervelli nel mezzo di montaggio in quello spazio. La carica negativa del tessuto aiuterà il cervello ad aderire alla carica positiva sulla superficie del vetrino.

Rimuovere il mezzo di montaggio in eccesso per consentire un posizionamento preciso dei cervelli sul vetrino in uno schema a griglia con i lobi antennali rivolti verso l'alto, quindi collegare i due vetrini coprioggetti facendo aderire un terzo vetrino coprioggetti per coprire i cervelli.

Per riempire la cavità, posizionare il mezzo di montaggio una goccia alla volta nel bordo della cavità e lasciarlo diffondere con un movimento capillare in modo che non disturbi il cervello.

Sigillare la cavità con smalto per unghie e conservare a una temperatura negativa di 20 gradi Celsius al buio per preservare la fluorescenza dei tessuti macchiati.

Nel protocollo di esempio, monteremo cervelli di Drosophila per l'imaging confocale di neuroni immunocolorati.

- Per montare i cervelli, costruisci uno scivolo a ponte. Posizionare due coperchi di base scivolano a circa un centimetro di distanza l'uno dall'altro su un carrello caricato positivamente. Assicurarsi che il lato caricato positivamente sia rivolto verso l'alto. Quindi far aderire i vetrini coprioggetto al vetrino con lo smalto per unghie e lasciare asciugare completamente lo smalto prima di procedere.

Quindi, posizionare il vetrino sotto uno stereomicroscopio e pipettare i cervelli in mezzo nello spazio tra i vetrini. Assicurati di regolare l'illuminazione per migliorare la visualizzazione del cervello.

Quindi, aspirare il supporto di montaggio extra dal vetrino, facendo attenzione a evitare il cervello. Quindi, rimuovere il supporto di montaggio in eccesso rimanente. Ciò consentirà di posizionare il cervello in modo più preciso. Ora, usando il forcipe, orienta il cervello in uno schema a griglia con i lobi antennali rivolti verso l'alto.

Quindi, posiziona un vetrino coprioggetti sul cervello e usa lo smalto per unghie per sigillare i bordi del vetrino coprioggetto superiore che sono attaccati ai vetrini coprioggetto di base.

A questo punto, caricare la cavità centrale con il nuovo supporto di montaggio in senso gocciolato, consentendo di aspirare il supporto sotto il vetrino coprioggetto per azione capillare. Quando la cavità è riempita, sigillarla completamente con uno smalto trasparente.