Montaggio di cervelli di Drosophila adulta: un metodo per preparare vetrini per l'imaging confocale

- Su un vetrino da microscopio caricato positivamente, far aderire due vetrini coprioggetti con una distanza sufficiente tra loro per creare uno spazio per il montaggio del cervello di Drosophila. Sotto lo stereomicroscopio, pipettare i cervelli nel mezzo di montaggio in quello spazio. La carica negativa del tessuto aiuterà il cervello ad aderire alla carica positiva sulla superficie del vetrino.

Rimuovere il mezzo di montaggio in eccesso per consentire un posizionamento preciso dei cervelli sul vetrino in uno schema a griglia con i lobi antennali rivolti verso l'alto, quindi collegare i due vetrini coprioggetti facendo aderire un terzo vetrino coprioggetti per coprire i cervelli.

Per riempire la cavità, posizionare il mezzo di montaggio una goccia alla volta nel bordo della cavità e lasciarlo diffondere con un movimento capillare in modo che non disturbi il cervello.

Sigillare la cavità con smalto per unghie e conservare a una temperatura negativa di 20 gradi Celsius al buio per preservare la fluorescenza dei tessuti macchiati.

Nel protocollo di esempio, monteremo cervelli di Drosophila per l'imaging confocale di neuroni immunocolorati.

- Per montare i cervelli, costruisci uno sci