Lesione neurale indotta da laser a due fotoni: un metodo per osservare la degenerazione e la rigenerazione degli assoni nelle larve di Drosophila

- Inizia montando una larva pulita e anestetizzata sotto un vetrino di vetro con la testa rivolta verso l'alto. Quindi, esponi l'area di interesse spingendo delicatamente il vetrino coprioggetti per arrotolare la larva e regolarne la posizione. Usa l'imaging confocale per localizzare le cellule neurali della larva. Identificare un assone specifico su una delle cellule neurali bersaglio come sito per la lesione.

Quindi esporre l'assone bersaglio a un laser a due fotoni a una potenza superiore a quella utilizzata per l'imaging per indurre danni. Un laser a due fotoni viene utilizzato grazie alla sua capacità di penetrare e localizzare con precisione il danno all'interno del tessuto vivo con un danno minimo al tessuto circostante.

Interrompere immediatamente l'esposizione al laser quando si verifica un danno al neurone bersaglio, con conseguente assotomia o recisione dell'assone. Infine, immagina il neurone danneggiato per visualizzare la sua degenerazione e la successiva rigenerazione nei punti temporali desiderati.

Nel protocollo di esempio, monteremo una larva per la microscopia, indurremo danni ai neuroni sensoriali larvali e monitoreremo la rigenerazione neurale.

- Inizia con un'