Il test CApillary FEeder (CAFE): un metodo per monitorare il consumo e la preferenza alimentare in Drosophila

- Per prepararsi al test Capillary Feeder, o CAFE, inserire capillari di vetro graduati o contrassegnati riempiti con cibo liquido colorato, prima l'estremità inferiore, attraverso i puntali della pipetta sopra una fiala sperimentale preassemblata. Assicurarsi che i capillari siano posizionati saldamente alla stessa altezza e non siano a contatto con l'apparecchio.

Segnare il livello iniziale del menisco in ciascun capillare. Quindi riporre le fiale in un ambiente a temperatura, umidità e luce controllate per tutta la durata dell'esperimento, sostituendo i capillari secondo necessità. Durante il test CAFE, le mosche mobili non sono trattenute e hanno libero accesso all'estremità aperta inferiore della micropipetta. Le mosche si nutrono volontariamente mentre estendono la proboscide e assumono il liquido, riducendo il terreno all'interno del capillare.

Per monitorare il consumo di cibo e la preferenza per un determinato periodo di tempo, registrare la discesa del menisco dal segno di partenza al livello alla fine di quel periodo dai capillari di qualificazione. Nel protocollo di esempio, vedremo il test CAFE con l'assemblaggio modificato per ottenere una ridotta evaporazione dai capillari pieni di liquido.

- Rimuovere con cautela il puntale della pipetta che chiude una delle aperture esterne e inserire un capillare di vetro riempito, con l'estremità inferiore per prima. Fissare il capillare riposizionando il puntale della pipetta accanto al capillare. Ripetere questo passaggio per tutte le soluzioni alimentari testate.

Quindi, posizionare le estremità dei capillari all'interno di tutte le fiale allo stesso livello, a 3 o 4 centimetri dal coperchio. Lasciare una certa distanza tra la carta da filtro per evitare perdite dal capillare. Usa un pennarello per etichettare l'estremità superiore del liquido colorato. Etichettali singolarmente utilizzando un codice a strisce per garantire che i diversi capillari possano essere identificati.

Posizionare i saggi CAFE preparati in una scatola di plastica con un intarsio a griglia. Utilizzare un tappo di spugna per applicare 100 microlitri di acqua fresca ogni 24 ore per mantenere costante l'umidità all'interno del test. Utilizzare quattro fiale separate riempite con 30 millilitri di H2O a doppia distillazione come dispositivi di umidità e posizionarle accanto ai dosaggi CAFE nella scatola di plastica.

Copri la scatola di plastica per creare un ambiente a umidità controllata durante l'esperimento. Trasferire la scatola in una posizione sicura in una camera climatica a temperatura, luce e umidità controllate per il periodo sperimentale. Prima di ogni intervallo di 24 ore, prendi nota delle mosche morte e usa il numero di mosche vive per calcolare il consumo per mosca per il periodo successivo.

Al termine del test e prima di sostituire il capillare, mantenere il test CAFE in posizione verticale. Non rimuovere il coperchio e segnare il menisco inferiore del capillare. Eliminare i dati se la fine del segno non è inferiore al segno iniziale. Sostituire i capillari usati con capillari appena riempiti per esperimenti a lungo termine ogni 24 ore.

Misura il declino del menisco. Quindi scartare i vecchi capillari. Quindi rimuovere con cura i capillari dal test e conservarli per la raccolta dei dati. Controllare se il liquido all'interno del capillare ha raggiunto l'estremità inferiore. Se il liquido all'interno del capillare non ha raggiunto l'estremità inferiore, scartare i dati.

Dopo l'esperimento, smonta la configurazione e lava le fiale, i coperchi e i tappi di spugna in un bagno di sapone. Quindi asciugarli per una notte a temperatura ambiente per un ulteriore utilizzo. Ripetere gli esperimenti con gli stessi genotipi in almeno tre giorni diversi. Utilizzando un calibro, misurare la distanza tra l'inizio e la fine del segno sul capillare. Infine, scartare i capillari dopo la misurazione.