0 visualizzazioni • 3:26 min. • April 30th, 2023
- Lasciare che la Drosophila deponga le uova durante la notte su un piatto contenente agar integrato con succo d'uva per visualizzare le uova e ricoperto di lievito per incoraggiare le mosche ad accoppiarsi e deporre le uova. Per rimuovere le uova, aggiungere acqua distillata al piatto e strofinare delicatamente la superficie con un pennello. Versate poi il composto attraverso una rete di nylon posta in una boccola di plastica per raccogliere le uova. Immergere le uova in due cicli di candeggina al 7% per rimuovere il corion, o strato esterno protettivo, dall'embrione. Questo processo è chiamato decoionazione.
Le uova sono ora attaccate al lato della boccola. Lavateli tre volte con acqua per rimuovere la candeggina. Infine, usa un pennello per trasferire le uova dalla boccola alle fiale per continuare lo sviluppo o per l'uso immediato in un esperimento. Nel protocollo di esempio, raccoglieremo e dechorionate le uova di Drosophila in condizioni sterili per allevare mosche con microbiota definito.
- Metti la rete di nylon in una boccola di plastica per preparare il setaccio per la raccolta delle uova. Se il giorno successivo verranno utilizzate le stesse mosche, trasferirle immediatamente in una nuova gabbia contenente piastre di agar per succo d'uva appena lievitato. La piastra del succo d'uva nella gabbia precedente contiene le uova di moscerino della frutta. Rimuovi le mosche morte con un pennello pulito e fai attenzione a non rompere l'agar. Sciacquare la piastra di agar con acqua distillata e spennellare delicatamente le uova dalla superficie dell'agar, quindi versare l'impasto sulla rete per raccogliere le uova.
Sterilizzare la cabina di biosicurezza con etanolo al 70%, quindi accendere la luce UV. Spruzzare tutte le forniture non biologiche con etanolo al 70% e posizionarle immediatamente nella cabina di biosicurezza, quindi sterilizzarle con luce UV.
- È fondamentale assicurarsi che venga praticata una buona tecnica asettica quando si lavora all'interno o quando si aggiungono o si rimuovono nuovi materiali alla cappa di biosicurezza.
- Trasferisci la boccola con le uova in una tazza da 120 millilitri e versa lentamente 90 millilitri di soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,6%, o candeggina al 7%, nella boccola, appena sotto il bordo. Usando una pinza, muovi periodicamente la boccola su e giù nella soluzione per risospendere le uova. Trasferire la boccola direttamente in una seconda tazza per campioni pre-riempita con 90 millilitri di candeggina.
Al termine del secondo trattamento di candeggina, le uova dovrebbero iniziare ad aderire ai lati della boccola. Scartare la candeggina e sciacquare completamente la boccola con acqua sterile. Ancora una volta, usa una pinza per risospendere l'uovo più volte durante ogni lavaggio. Entro la fine del terzo lavaggio, la maggior parte delle uova dovrebbe essere attaccata al lato della boccola.
Usando un pennello sterile, trasferisci le uova dal lato della boccola alla dieta sterile. Lasciare i tappi allentati per consentire all'ossigeno di entrare nel tubo. Le uova trasferite saranno visibili sulla superficie della dieta.