Conteggio delle unità formanti colonie (CFU): quantificazione dei batteri dai corpi dei moscerini

- Per prima cosa, raccogli le mosche allo stadio di sviluppo desiderato e mettile in una provetta sterile. Per contare solo il microbiota interno, sterilizzare l'esterno delle mosche immergendole in etanolo al 70%. Per misurare sia il microbiota interno che quello esterno, saltare questa fase di sterilizzazione. Quindi, macinare le mosche in un piccolo volume di terreno di coltura batterica utilizzando perle di ceramica e un omogeneizzatore di tessuti, o manualmente con un pestello. Prestare attenzione a non introdurre batteri da fonti esterne, per evitare di contaminare i campioni.

Ora dovresti avere una miscela omogenea contenente batteri che puoi coltivare. Aumentare il volume dell'omogeneizzato utilizzando un mezzo batterico liquido. Eseguire diluizioni seriali dell'omogeneizzato e piastrare, un volume costante di queste diluizioni sul terreno di crescita solido appropriato per i batteri. Man mano che i batteri crescono, si formeranno colonie sul piatto. Trova la diluizione che ha un intervallo da 10 a 100 colonie per determinare le unità formanti colonie, o CFU, del campione.

Nel protocollo di esempio, inoculeremo mosche sterili con una coltura gnotobiotica o batterica definit