Preparazione di ovociti di Drosophila fissati per l'immunocolorazione: un metodo ad alto rendimento per fissare e rimuovere la membrana esterna

- Inizia pulsando la Drosophila anestetizzata insieme al tampone in un frullatore per rompere le mosche in piccoli pezzi. Filtrare il composto attraverso una rete per rimuovere le parti del corpo più grandi. Quindi, lascia affondare le uova mentre i frammenti più grandi rimangono in superficie e possono essere rimossi.

Ripeti questo processo utilizzando una rete più piccola per rimuovere ulteriori detriti. Raccogli le uova in una fiala e, se le uova devono essere trattate con un farmaco, fallo a questo punto. Quindi, rimuovere il liquido e sostituirlo con un fissativo. Aggiungi eptano per aiutare il fissativo a penetrare nella membrana che circonda l'uovo.

Quindi, lavare via il fissativo con PBS. Per colorare gli ovociti, rimuovere le membrane esterne protettive per consentire la penetrazione degli anticorpi. Pipettare gli ovociti sulla parte smerigliata di un vetrino. Posiziona un vetrino coprioggetti sulle uova e arrotola delicatamente il vetrino coprioggetti con un movimento avanti e indietro per separare meccanicamente il corion e la membrana vitellina dall'uovo. Gli ovociti sono ora pronti per essere colorati.

Nel protocollo di esempio, prepareremo gli ovociti nella meiosi I p