Rottura delle cuticole: un metodo per raccogliere l'emolinfa dalle larve di Drosophila

- Per iniziare, pipettare una goccia di tampone su un tampone di dissezione pulito. Quindi, posiziona una larva viva essiccata sulla gocciolina. La Drosophila, come altri artropodi, ha un sistema circolatorio aperto in cui il cuore pompa l'emolinfa in tutto il corpo, bagnando gli organi interni. Per rilasciare l'emolinfa, che è il sangue combinato e il liquido interstiziale degli artropodi, usa una pinza e apri la cuticola, il rivestimento esterno semirigido delle larve.

Quindi, scartare la carcassa e trasferire la soluzione di emolinfa dalla piastra di dissezione alla soluzione tampone refrigerata in una provetta da microcentrifuga. Infine, utilizzare un emocitometro per contare il numero di emociti, le cellule dell'emolinfa, che sono stati raccolti. In questo protocollo, raccoglieremo l'emolinfa dalle larve di Drosophila melanogaster.

- Iniziare la raccolta dell'emolinfa aggiungendo 10 microlitri di 1x PBS a una provetta da microcentrifuga e posizionando la provetta sul ghiaccio. Quindi, posiziona una goccia da 10 microlitri di 1x PBS su un tampone da dissezione pulito. Seleziona una singola larva e asciugala posizionandola su una salvietta di fazzoletti. Quindi trasferirlo sulla gocciolina PBS sul tampone di dissezione.

Usando una pinza, apri delicatamente e capovolgi la cuticola per rilasciare l'emolinfa, quindi scarta la carcassa. Con una pipetta, raccogliere l'emolinfa dal tampone di dissezione. Aggiungere l'emolinfa alla provetta per microcentrifuga PBS ghiacciata e mescolare pipettando su e giù. Caricare 10 microlitri di campione in una camera emocitometrica ed effettuare una lettura della concentrazione.