0 visualizzazioni • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Per iniziare, fissa una pupa di moscerino della frutta dorsale, o posteriore, con il lato rivolto verso l'alto. Rimuovere l'opercolo o l'estremità anteriore della pupa per esporre la testa dell'animale. Continuate ad aprire la pupa tagliando e staccando il budello. Una volta liberata, coprire la pupa sezionata con PBS per evitare l'essiccazione. Praticare un taglio netto in sezione trasversale attraverso il torace e rimuovere la parte posteriore della carcassa.
Per esporre il complesso occhio-cervello, che comprende le due retine attaccate ai lobi ottici, iniziare a strappare l'epitelio dal bordo tagliato del torace e continuare ad aprire gradualmente la capsula della testa. Quindi, guidare con attenzione il complesso occhio-cervello lontano dai resti della capsula della testa.
Nel protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione di una dissezione occhio-cervello di una pupa utilizzata per isolare il tessuto per varie analisi a valle.
- Dopo aver posizionato le pupe di Drosophila su un piatto di dissezione nero, stendere un nuovo pezzo di nastro biadesivo sul piatto di dissezione lontano dalle pupe e utilizzare un paio di pinze per posizionare con cura il lato dorsale delle pupe verso l'alto sul nastro.
Metti il piatto sotto uno stereomicroscopio e usa una pinza per rimuovere l'opercolo di ogni pupa. Usa le forbici da microdissezione per tagliare ogni custodia pupale, consentendole di aprirle per rivelare la testa, il torace e il segmento addominale anteriore e fissare i bordi della custodia pupale al nastro biadesivo.
Forare l'addome di ogni pupa con una pinza affilata e rimuovere la pupa dalla sua custodia pupale. Posizionare la pupa sulla capsula di dissezione lontano dal nastro adesivo e coprire la pupa con 400 microlitri di PBS ghiacciato. Usa le pinze per afferrarle per l'addome e usa le forbici da microdissezione per praticare un'incisione in sezione trasversale pulita attraverso il torace, tagliando le pupe a metà.
Usando due paia di pinze sottili, afferrare i bordi tagliati di ciascun epitelio toracico e strappare gradualmente il torace e la capsula della testa, esponendo il complesso occhio-cervello nel tessuto adiposo circostante. Quindi, senza afferrare il tessuto, usa una pinza per guidare ogni complesso occhio-cervello traslucido, bianco sporco e a forma di manubrio lontano dai resti della capsula della testa.