Drosophila In Vivo Imaging del calcio: un metodo per l'imaging funzionale dell'attività neuronale

- Per eseguire l'imaging del calcio in vivo nel sistema nervoso della Drosophila, indirizzare l'espressione di un indicatore del calcio geneticamente codificato, come GCaMP, ai neuroni di interesse. Quando i neuroni attivano un potenziale d'azione, la rapida depolarizzazione della membrana provoca l'apertura dei canali del calcio voltaggio-dipendenti, portando a un afflusso di calcio extracellulare nella cellula.

GCaMP è una proteina di fusione in cui la proteina fluorescente verde potenziata, o EGFP, viene modificata e fusa al frammento M13 della catena leggera della miosina all'N-terminale e alla proteina legante il calcio, la calmodulina, all'estremità C. Il calcio si lega alla calmodulina, innesca cambiamenti di conformazione nella GCaMP, causando un aumento della fluorescenza della proteina.

Per visualizzare i cambiamenti nella fluorescenza GCaMP come proxy per l'attività neuronale in vivo, esporre la regione del sistema nervoso con l'attività prevista. Quindi, utilizzare un microscopio a fluorescenza in grado di catturare le dinamiche GCaMP ed è dotato di una configurazione di erogazione dello stimolo. Eroga lo stimolo, ad esempio un odore, mentre registri la fluorescenza GCa