Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- في أنبوب يحتوي على العازلة M9، وجمع ما يصل إلى 150 الديدان hermaphrodite في المرحلة المطلوبة من التنمية.
عرض الأنبوب تحت المجهر تشريح عند إزالة supernatant لمنع فقدان العينة. نقل الديدان إلى طبق زجاجي مع الحد الأدنى من حجم المخزن المؤقت M9. إضافة levamisole لتخدير الديدان.
حدد موقع رأس الدودة والبلعوم، أو فورجوت، الذي يحتوي على هيكلين على شكل لمبة.
بمجرد تعطيل القطع ، يتم قذف ذراعي الغدد الصماء أو دفعهما خارج الجسم بسبب الضغط الداخلي للدودة.
في هذا المثال، سنقوم بتشريح النواد من الديدان البالغة لتحليل المناعة.
- اختر 100 إلى 150 دودة في المرحلة التنموية المطلوبة واجمعها في أنبوب ميكروسينتريف سعة 1.5 ملليلتر يحتوي على 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت M9. ثم املأ أنبوب الطرد المركزي الدقيق ب 900 ميكرولتر إضافي من المخزن المؤقت M9 واطاردته المركزية بمعدل 1000 مرة غرام لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
تحت المجهر تشريح، وإزالة بلطف 900 ميكرولتر من العازلة M9. ثم، كرر غسل مرتين أخريين لإزالة معظم البكتيريا المرفقة.
بعد ذلك ، باستخدام طرف micropipette 200 ميكرولتر مع بئر موسع ، قم بنقل الديدان في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت M9 إلى طبق ساعة زجاجية سفلي مسطح.
تحت المجهر تشريح, وضع كل إبرة تحت وعلى كل دودة وجعل قطع غرامة على كل دودة بالقرب من لمبة البلعوم الثاني باستخدام مقص مثل الحركة. قطع جميع الحيوانات مرة واحدة على الأقل في غضون خمس دقائق لlevamisole للبقاء فعالة.
- من المهم جدا أن يتم تشريح الحيوانات في الطبق في أقل من خمس دقائق.
- في حالة عدم رؤية النند الطارد ، فقط تخطي هذا الحيوان.
