Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Dans un tube contenant le tampon M9, recueillir jusqu’à 150 vers hermaphrodites au stade de développement souhaité. Retirer les bactéries des vers en les lavant avec le tampon M9 et en centrifugant l’échantillon.
Voir le tube sous un microscope disséquant lors de l’enlèvement du supernatant pour éviter la perte d’échantillon. Transférer les vers dans un plat en verre avec un volume minimal de tampon M9. Ajouter la levamisole pour anesthésier les vers.
Localiser la tête du ver et le pharynx, ou goutte, qui contient deux structures en forme d’ampoule. Utilisé deux aiguilles pour couper à travers le ver derrière le pharynx. Assurez-vous de compléter la dissection rapidement pour éviter d’affecter le tissu.
Une fois la cuticule perturbée, les deux bras des igènes sont extrudés ou poussés hors du corps en raison de la pression interne du ver.
Dans cet exemple, nous disséquerons les 9ds des vers adultes pour l’analyse de l’immunofluorescence.
- Choisissez de 100 à 150 vers au stade de développement souhaité et recueillez-les dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre contenant 100 microlitres de tampon M9. Ensuite, remplissez le tube de microcentrifugeuse de 900 microlitres de tampon M9 et centrifugez-le à 1 000 fois g pendant 1 minute à température ambiante.
Au microscope disséquant, retirer délicatement 900 microlitres du tampon M9. Ensuite, répétez le lavage deux fois de plus pour éliminer la plupart des bactéries ci-jointes.
Ensuite, à l’aide d’une pointe de micropipette de 200 microlitres avec un alésage élargi, transférez les vers en 100 microlitres de tampon M9 dans un plat plat de montre en verre à fond plat. Ensuite, ajoutez 1 à 3 microlitres de 0,1 levamisole molaire au plat et faites-le tourbillonner doucement. Maintenant, attachez deux aiguilles de calibre 25 à deux seringues pour faire un outil de dissectation pour chaque main.
Sous un microscope disséquant, placez chaque aiguille sous et au-dessus de chaque ver et faites une coupe fine sur chaque ver près de la deuxième ampoule pharyngéale à l’aide d’un ciseaux comme le mouvement. Coupez tous les animaux au moins une fois tous dans les cinq minutes pour que le levamisole reste efficace.
- Il est très important que la dissection des animaux dans le plat soit terminée en moins de cinq minutes.
- Dans le cas où une 9ine extrudée n’est pas visible, il suffit de sauter sur cet animal. Les 9ds extrudés appropriés sont visibles ici.
