Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- В трубке, содержащей буфер M9, соберите до 150 гермафродитных червей на желаемой стадии развития. Удалите бактерии из червей путем мытья буфером M9 и центрифугирования образца.
Просмотр трубки под рассечением микроскопа при удалении супернатанта, чтобы предотвратить потерю образца. Передача червей в стеклянную тарелку с минимальным объемом буфера M9. Добавьте левамизол для обезболивания червей.
Найдите голову червя и глотки, или foregut, который содержит две лампообразные структуры.
После того, как кутикула нарушается, две руки гонады выдавливаются или выталкиваются из тела из-за внутреннего давления червя.
В этом примере мы будем вскрывать гонады от взрослых червей для иммунофлюоресценции анализа.
- Выберите от 100 до 150 червей на желаемой стадии развития и соберите их в 1,5-миллилитровую микроцентрифугную трубку, содержащую 100 микролитров буфера M9. Затем заполните микроцентрифугную трубку еще 900 микролитров буфера M9 и центрифуг в 1000 раз г в течение 1 минуты при комнатной температуре.
Под рассеченным микроскопом аккуратно удалите 900 микролитров буфера M9. Затем повторите стирку еще два раза, чтобы удалить большую часть прикрепленных бактерий.
Далее, используя 200-microliter micropipette наконечник с расширенным отверстием, передать червей в 100 микролитров буфера M9 в плоский нижний стеклянный часы блюдо. Затем, добавить от 1 до 3 микролитров 0,1 молар левамизола к блюду и вихрем его мягко. Теперь, приложите два 25-го калибра иглы на два шприца, чтобы сделать один вскрытый инструмент для каждой руки.
Под рассечением микроскопа, положение каждой иглы под и над каждым червем и сделать тонкий разрез на каждого червя вблизи второй фарингеальной лампы с помощью ножниц, как движение. Cut всех животных по крайней мере один раз все в течение пяти минут для левамизола, чтобы оставаться эффективным.
- Очень важно, чтобы вскрытие животных в блюде было завершено менее чем за пять минут.
- В случае, если экструдированная гонада не видна, просто пропустите это животное.
