Preparazione dei vetrini per nematodi: un metodo per montare gli animali su un cuscinetto di agar

0 visualizzazioni2:09 min. • April 30th, 2023

- Per prima cosa, posiziona un vetrino da microscopio tra altri due vetrini con del nastro adesivo. Questi forniscono supporto e distanziatori per la preparazione del tampone di agarosio. Quindi, posizionare una goccia di agarosio fuso sul vetrino. Premere immediatamente su di esso con un'altra diapositiva.

Dopo che l'agarosio si è solidificato, separare accuratamente i vetrini in modo che l'agarosio rimanga su un vetrino. Usa sempre assorbenti appena fatti poiché i cuscinetti secchi possono disidratare gli animali. Assicurarsi che non vi siano crepe o bolle che possono compromettere l'integrità del pad.

Quindi, aggiungi una goccia di anestetico al centro del pad e trasferisci da 10 a 15 animali, portando con sé il minor numero possibile di batteri. L'eccesso di batteri potrebbe interferire con l'imaging. Se la soluzione anestetica si asciuga, aggiungere una seconda goccia sugli animali.

Posizionare delicatamente un vetrino coprioggetti sul tampone. Evitare di formare bolle o esercitare troppa pressione su di esso per evitare di danneggiare gli animali. Infine, etichettare il vetrino, che è pronto per l'imaging.

- Inizia preparando i vetrini per l'imaging. Posizionare una goccia di agarosio fuso su un vetrino da microscopio e premere immediatamente la gocciolina con un altro vetrino da microscopio, appiattendo delicatamente l'agarosio È necessario che l'agarosio si asciughi per un minuto.

Quindi, separare con cura i due vetrini e lasciare il tampone solidificato su uno dei vetrini. Posizionare il vetrino sul tavolino del microscopio e aggiungere una goccia di anestetico da 5 a 10 microlitri al centro del tampone di agras.

Utilizzare un plettro sterilizzato a caldo per trasferire rapidamente da 10 a 15 animali dalla piastra di riserva alla gocciolina di anestetico prima che la soluzione si asciughi. Quindi, applicare un vetrino coprioggetti posizionandolo appena sopra il tampone di agarosio e lasciandolo cadere delicatamente verso il basso.