Dissociazione a singola cellula di Caenorhabditis elegans: un metodo per isolare le cellule vive

- Iniziare con vermi pellettati lavati e aggiungere un tampone di lisi contenente SDS, un detergente, e DTT, un agente riducente. Questo rompe la cuticola protettiva del verme, esponendo il corpo alla dissociazione cellulare. Evitare l'esposizione prolungata al tampone di lisi per ridurre al minimo la lisi cellulare e la morte.

Quindi, rimuovere i reagenti di lisi con diversi lavaggi di tampone di isolamento freddo. È importante che questo tampone abbia la corretta osmolarità per prevenire la morte cellulare. Utilizzare un enzima proteasi per rompere le connessioni cellula-cellula. Aiuta il processo di omogeneizzazione insieme all'energia meccanica pipettando la miscela contro la parete del tubo.

Aggiungere terreni contenenti siero per fermare la reazione enzimatica e antibiotici per prevenire la contaminazione. Pellettare e lavare il campione più volte per rimuovere la maggior parte dei detriti.

Infine, posizionare il tubo sul ghiaccio per consentire la sedimentazione per gravità. I detriti, compresi i resti della cuticola o i grumi di cellule, si depositeranno, mentre le cellule dissociate rimarranno sospese nello strato superiore del terreno. Queste cellule possono essere utiliz