drosofila Saggio del labirinto a Y: un metodo per valutare le risposte olfattive nelle mosche

- Un labirinto a Y è costituito da un connettore a forma di Y con tre fiale volanti collegate ad esso da tubi dritti o conici. Le mosche si muovono attraverso il labirinto verso il lato con lo stimolo che preferiscono. Per iniziare l'esperimento, inserire in ogni fiala una carta velina con la soluzione contenente le sostanze chimiche volatili. Quindi, collegarli ai tubi conici. I tubi affusolati limitano la capacità delle mosche di tornare al centro del labirinto e rallentano la diffusione delle sostanze chimiche volatili.

Successivamente, raffredda le mosche affamate per rallentarle. Non utilizzare l'anestesia chimica, poiché ciò potrebbe influire sull'esito del test. Collega rapidamente la fiala con le mosche fredde al lato finale del labirinto. Lascia che le mosche esplorino il labirinto. Per ridurre qualsiasi preferenza causata dalla luce intensa, eseguire questo passaggio sotto la luce rossa lontana, che le mosche non vedono. Infine, conta le mosche su ciascun lato del labirinto. La loro posizione nel labirinto indica la loro preferenza verso quell'odore chimico volatile.

Nel protocollo di esempio, vedremo una configurazione del saggio del labirinto a Y con Drosophila wild type.

- Prima di condurre il test la mattina seguente, alla fine della giornata, trasferire coorti di 10-20 linee sperimentali in fiale di vetro con l'umidità fornita da un asciugamano bagnato. Le mosche devono essere testate in 16-18 ore, altrimenti potrebbero morire a causa dell'essiccazione o della fame. Il giorno successivo, assembla il labirinto a Y. Inizia unendo il connettore a forma di Y a due fiale di vetro utilizzando connettori in schiuma con puntali per pipette tagliati che formano i condotti. La loro forma affusolata rende questi passaggi unidirezionali.

Il terzo ramo della "Y" è attaccato a un tubo di caricamento, costituito dalla grande porzione di un puntale di pipetta, e consente il passaggio dalla fiala di carico al punto di scelta del labirinto. Al di là di ogni tunnel di rastremazione c'è una fiala di vetro, una delle quali deve essere caricata con un odorizzante. Caricali come boli da 40 microlitri imbevuti di quadrati di carta velina da 28 millimetri. Quale dei due contiene l'odorante dovrebbe alternarsi in modo casuale.

Per condurre il test, prima raffreddare brevemente le mosche sul ghiaccio, in modo che le mosche siano rallentate. Questo dovrebbe essere sotto la luce rossa lontana delle lampadine a LED e a 25 gradi Celsius. Rilascia delicatamente la coorte di mosche nella fiala di caricamento e carica il labirinto a Y con le mosche di prova. Non usare l'anestesia gassosa.

- È davvero fondamentale trasferire le mosche nella fiala di carico in modo rapido e delicato. In realtà è il passo più difficile di questo esperimento perché le mosche devono svegliarsi rapidamente prima della diffusione degli odori nel labirinto a Y.

- Le mosche dovrebbero essere lasciate esplorare il labirinto per 24 ore, quindi un numero massimo di mosche si sposta su una o l'altra fiala di vetro. Il numero di mosche presenti nelle diverse tube serve a calcolare l'indice olfattivo. A questo valore dovrebbero essere applicati metodi statistici standard, raccolti dal comportamento di un massimo di 10 mosche.

Se le coorti di 10 mosche non forniscono risultati coerenti, le prove possono essere eseguite con coorti di 20 mosche. Per ripulire i componenti del labirinto, immergerli, smontati, in RBS 35 MD durante la notte. Seguire con risciacqui in acqua di rubinetto e un risciacquo finale in acqua deionizzata prima dell'asciugatura all'aria.