0 visualizzazioni • 3:08 min. • April 30th, 2023
- Inizia selezionando una larva di terzo stadio, la più grande delle forme larvali, dal terreno di coltura e lavala con acqua per rimuovere il cibo. Poiché gli occhi larvali, o organi di Bolwig, si trovano nella parte anteriore superiore della larva, posizionare la larva al centro di una piastra di agar con la fonte di luce sopra l'animale. Spegni la luce della stanza e lascia che la larva si acclimati al buio.
Poiché la larva è appena percettibile in un punto luminoso creato dalla luce visibile, accendi le luci LED a infrarossi per illuminare l'animale per la fotocamera. Aspetta che l'animale inizi a strisciare dritto per controllare il suo percorso. E poi ruota la piastra in modo che la larva strisci direttamente verso il punto luminoso. Registra l'animale che striscia nella luce e poi si allontana dal punto luminoso. Questa tattica di evitamento della luce aiuta le larve a evitare i predatori scavando nel cibo.
Nell'esempio seguente, eseguiremo il saggio del punto luminoso per testare la capacità di diversi ceppi genetici di larve di Drosophila di sfuggire alla luce.
- Prima di introdurre la larva alla configurazione di imaging, acquisire un breve video della posizione della luce e denominare il video di sfondo di controllo non filtrato "lightarea1". Riposiziona il filtro sull'obiettivo della fotocamera e accendi una luce lontana dal dispositivo sperimentale con un'impostazione il più bassa possibile, pur consentendo alle larve di essere osservate chiaramente. Usa un cucchiaio per rimuovere alcune larve dal terreno di coltura e seleziona delicatamente una larva di terzo stadio.
Lavare la larva in acqua distillata e posizionare la larva al centro della piastra di agar. Rimuovi delicatamente l'acqua in eccesso dalla larva e spegni la luce della stanza. Lasciare che la larva si acclimati per due minuti nell'ambiente buio prima di accendere la luce LED a infrarossi. Il seguente esperimento di comportamento di evitamento della luce deve essere eseguito al buio. Per comodità della dimostrazione, abbiamo girato in piena luce.
Spazzolare delicatamente la larva al centro del piatto. Quando la larva inizia a strisciare dritta, ruota la piastra per far sì che la larva si diriga verso il punto luminoso. Fare clic su Acquisisci, Imposta e Acquisizione video per selezionare il percorso di salvataggio. E fai clic su Avvia registrazione per registrare. Lascia che la lava strisci verso, entri e lasci il punto luminoso fino a quando non è quasi fuori dal campo visivo, quindi fai clic su Interrompi registrazione.
Allontanare il filtro dalla fotocamera e acquisire un breve video della posizione del punto luminoso. Quindi nomina il post come video non filtrato, "lightarea2", e confronta questo video con il video "lightarea1" per assicurarti che la posizione del punto luminoso non venga modificata.