Dissezione della ghiandola dell'anello larvale: isolamento degli organi endocrini in via di sviluppo da Drosophila

0 visualizzazioni4:07 min • April 30th, 2023

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- Per sezionare la ghiandola anulare, avrai bisogno di un microscopio da dissezione, due pinze, un ago di calibro fine che funga da coltello da dissezione e una soluzione tamponata. Trova la ghiandola anulare identificando la testa delle larve, che contiene i ganci della bocca. Viaggia lungo la lunghezza delle larve per trovare il cervello, che si trova tra il torace e le sezioni addominali. La ghiandola anulare è più piccola del cervello ed è situata in cima.

La ghiandola anulare larvale è una struttura endocrina complessa che contiene tre diversi organi endocrini. Il corpo allato si trova al centro della ghiandola anulare e produce l'ormone giovanile, che regola lo sviluppo e l'invecchiamento. La ghiandola protoracica circonda il corpo allato e costituisce la maggior parte della struttura. L'ecdisone, un ormone coinvolto nel malto degli insetti, è prodotto da questa ghiandola. Al di sotto della ghiandola protoracica si trova il corpo cardiaco, che produce l'ormone adipocinetico, un regolatore dei nutrienti.

In questo esempio, sezioniremo il cervello larvale e le ghiandole anulari per l'immunoistochimica.

- Dopo aver preparato le larve, iniziare la dissezione in un piatto di tre centimetri riempito di PBS al microscopio da dissezione. Per prima cosa, afferra il gancio della bocca con una pinza. Quindi, usando le micro forbici, recidere il corpo a circa un terzo della lunghezza dalla punta anteriore. Quindi, tieni la lunghezza anteriore con un paio di pinze e usa un secondo paio per spingere delicatamente la punta della testa nel corpo per capovolgere infine il corpo larvale.

Preparare fino a 20 larve in questo modo entro 10 minuti e poi trasferirle in soluzione fissativa. Dopo 30 minuti, lavare i preparati e procedere con l'immunocolorazione. Dopo l'immunocolorazione delle larve, utilizzare una pipetta monouso per trasferire i campioni in un piatto riempito con PBT allo 0,3%.

Sotto un microscopio da dissezione, afferrare la cuticola o il gancio della bocca con un paio di pinze. Quindi, usa un ago calibro 27 attaccato a una siringa da un millilitro come un coltello per rimuovere il complesso cervello-ghiandola-disco oculare dalla cuticola del corpo tagliando via la punta anteriore dell'esofago e i dischi oculari.

Quindi, usando una pinza, separa accuratamente l'esofago e l'intestino dal complesso cervello-ghiandola-disco oculare. Estrarre l'intestino verso il lato posteriore, poiché l'esofago passa attraverso il cervello sopra il cordone nervoso ventrale. Infine, per isolare il complesso ghiandola dell'anello cerebrale, tagliare con cura le connessioni tra il disco cerebrale, i dischi oculari e i dischi delle gambe con un coltello ad ago.

- È essenziale utilizzare una pinza fine con spigoli vivi durante la dissezione. Ti consiglio vivamente anche di affilare le pinze con una mola dell'Arkansas per unire i loro bordi senza spazi vuoti.

- Per trasferire i campioni, utilizzare una micropipetta con punta a foro largo. Depositare i campioni al centro del vetrino. Quindi, usa una pinza per posizionare i campioni sui lati ventrali in modo che la ghiandola anulare, che si trova sul lato dorsale del cervello, possa essere visualizzata. Quindi, inclinare la slitta e rimuovere il più possibile il PBT in eccesso. Quindi, mettere una goccia di reagente di montaggio vicino ai campioni e utilizzare una pinza per abbassare lentamente un vetrino coprioggetti sul reagente e poi sui campioni.

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Ultimo aggiornamento: 1 agosto 2026