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- Per misurare la durata media della vita di una popolazione di nematodi, iniziare con larve di L1 sincronizzate nello sviluppo in tampone M9. Determina la densità delle larve, quindi aggiungi 50 a ogni piatto. Preparare almeno tre piastre di replica per condizione, nonché le piastre di backup.
Lasciare che questi vermi si sviluppino normalmente fino a raggiungere lo stadio L4. Ora puoi aggiungere FUdR alle piastre, che impedirà ai vermi di produrre progenie. In alternativa, dovrai spostare i vermi su nuove piastre ogni giorno dopo il conteggio, per assicurarti di misurare solo la durata della vita di una singola generazione.
Quindi, rimuovi tutti i maschi. Questo rimuoverà le variabili del sesso e dell'accoppiamento dall'esperimento. Il giorno successivo, conta il numero di vermi vivi sul piatto cercando un movimento spontaneo o una risposta al tocco delicato. Rimuovi tutti i vermi morti e registra i numeri. Conta i vermi sopravvissuti ogni giorno finché non ne rimangono più. Nel protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione di un saggio della durata della vita.
- Caricare le piastre preparate con semi batterici con 50 animali L1 ciascuna. Posizionare le piastre in un'incubatrice a 20 gradi Celsius fino a quando gli embrioni non si sviluppano fino allo stadio L4. Il normale sviluppo da L1 a L4 dura circa 40 ore.
Quindi, per prevenire la produzione di progenie, aggiungere 160 microlitri di FUdR 50x a ciascuna piastra. Quindi rimuovi i maschi, poiché la durata della vita è tipicamente misurata solo con gli ermafroditi. Una volta completate, reimballare le piastre nell'incubatore a 20 gradi Celsius.
Fino a quando tutti i vermi non saranno morti, segna la loro vitalità su base giornaliera. Per fare ciò, tocca delicatamente ogni nematode non in movimento sulla testa con un filo di platino o un ciglio. Gli animali non reattivi sono morti e devono essere rimossi dalla targa. Prendi nota di eventuali anomalie durante questa routine.