Saggio di deposizione delle uova: un metodo per quantificare il comportamento di deposizione delle uova di C. elegans

- Gli esperimenti per quantificare la deposizione delle uova hanno rivelato le componenti neurologiche e i segnali ambientali che influenzano questo comportamento. I cambiamenti nel comportamento di deposizione delle uova possono indicare effetti tossici sul sistema neuromuscolare o riproduttivo.

Per testare la tossicità, allevare uova sincronizzate con lo sviluppo su piastre di terreno di crescita per nematodi con e senza il composto di interesse. Questi esperimenti utilizzano cibo batterico per vermi ucciso dal calore per impedire ai batteri di metabolizzare il composto. Permettete a questa generazione di crescere fino a diventare giovani adulti.

Quindi spostare i vermi su nuove piastre in condizioni di controllo o sperimentali appropriate e lasciarli deporre le uova per 24 ore. Ogni giorno, trasferisci gli adulti in un nuovo piatto e conta le uova sul piatto precedente. Continuate fino a quando gli adulti smettono di deporre, circa cinque giorni per i vermi selvatici. Calcola il numero di uova deposte per verme adulto ogni giorno e somma il totale alla fine dell'esperimento.

Nel protocollo di esempio, utilizzeremo il test di deposizione delle uova di C. elegans per testare l'etoposide, un farmaco chemioterapico, per la tossicità riproduttiva.

- Incubare le uova sincronizzate per l'età sulla piastra NGM contenente DMSO o etoposide a 20 gradi Celsius per 64 ore, fino allo stadio di giovane adulto. Trasferire cinque vermi adulti su nuove piastre NGM senza sostanze chimiche o nuove piastre NGM contenenti lo stesso pretrattamento chimico e incubarli per 24 ore.

Trasferisci gli adulti su nuove piastre NGM, come appena dimostrato, e conta il numero di uova ogni giorno. Inoltre, conta i vermi che sono strisciati via, sono morti o si sono schiusi internamente. Eseguire calcoli secondo il protocollo di testo.