Misurazioni dell'area muscolare di C. elegans: un metodo standardizzato per quantificare la morfologia del muscolo striato

- C. elegans ha due tipi di muscoli. I singoli sarcomeri o muscoli non striati includono quelli della faringe e della vulva. I sarcomeri multipli o muscoli striati obliquamente sono muscoli della parete corporea di forma romboidale che prendono il nome dal modello striato regolare delle loro fibre di miosina.

Sono disposti in coppie sfalsate come quattro fasci orientati longitudinalmente nei quattro quadranti del corpo del verme visti in sezione trasversale. Ogni cellula ha molti punti di attacco equidistanti all'ipoderma e alla cuticola. Questa disposizione aiuta a tradurre le onde di contrazione muscolare in una locomozione regolare.

Per visualizzare questi muscoli, è possibile visualizzare vermi immobilizzati con miosina marcata transgenicamente con GFP mediante microscopia confocale fluorescente. Utilizza il software di analisi per misurare l'area di una cellula muscolare striata e qualsiasi lacuna nel modello di fibre di quella cellula. Le lacune nell'organizzazione delle fibre muscolari potrebbero indicare l'interruzione dovuta alla degradazione delle fibre o all'accumulo di detriti cellulari. Calcolare il rapporto tra l'area dello spazio e l'area totale per definire l'entità dell'interruzione. Nel protocollo di esempio, valuteremo quantitativamente la morfologia muscolare della parete corporea utilizzando le Fiji.

- Per misurare l'area delle cellule muscolari, apri l'immagine nel software Fiji e usa la selezione poligonale per tracciare attentamente una singola cellula muscolare obliqua. Regola la linea del poligono alla fine trascinando il punto di ancoraggio per migliorare il tracciamento. Passare alla scheda Analizza nella parte superiore del software e fare clic su Misura per calcolare l'area selezionata.

Per le cellule muscolari con una regione degenerata o mancante, tracciare l'area mancante con lo strumento di selezione del poligono e fare nuovamente clic su Misura. Se ci sono più spazi vuoti, tracciali separatamente. Calcola il rapporto tra l'area dello spazio e l'area dell'intera cella. Un rapporto elevato indica una maggiore entità della degenerazione muscolare e, se non ci sono regioni mancanti, il rapporto viene calcolato come zero.