Alimentazione FITC-destrano: un metodo per quantificare la permeabilità intestinale in C. elegans

- C. elegans è utilizzato come modello sperimentale di infezione da patogeni intestinali che causano la malattia, in parte, interrompendo la barriera intestinale, aumentandone la permeabilità. Per quantificare l'integrità della barriera dopo l'esposizione a un batterio o a un composto chimico di interesse, raccogliere i vermi lavandoli via dalle piastre.

Successivamente, posiziona questi vermi su piastre di agar con cibo etichettato composto da E. coli ucciso a caldo mescolato con FITC-destrano, un polisaccaride ad alto peso molecolare con un'etichetta fluorescente.

Consenti ai vermi di mangiare i batteri etichettati. Quelli con barriere intestinali intatte elimineranno rapidamente il cibo, mentre nei vermi con intestino più permeabile, il marcatore fluorescente penetrerà oltre il lume dell'organo.

Trasferisci i vermi in una soluzione di formaldeide per fissare gli animali. Dopo 1 o 2 minuti, sostituire la formaldeide con un mezzo di montaggio.

Infine, visualizza i vermi mediante microscopia a fluorescenza. Si noti che i granuli intestinali di C. elegans sono autofluorescenti, quindi ci sarà un segnale di fondo. Ma nel complesso, una maggiore fluorescenza intestinale indica una mag