Microiniezione di gonadi: un metodo di somministrazione di composti direttamente nella linea germinale di C. elegans

- Per prepararsi all'iniezione, utilizzare un piccone a vite senza fine per stendere una traccia di olio di alocarburi su un tampone di agarosio. Metti i vermi nell'olio e immobilizzali spingendoli delicatamente sul tampone di agar. Assicurarsi che l'olio copra completamente gli animali. Permette all'ossigeno di raggiungere i vermi prevenendo l'essiccazione. Quindi, posizionare il tampone di agarosio su un microscopio per iniezione e posizionare l'ago perpendicolarmente al verme, mirando all'estremità distale di un braccio della gonade.

Spingi delicatamente l'ago attraverso la cuticola e inietta il braccio della gonade con l'acido nucleico o il composto di interesse. Ogni braccio della gonade contiene un sincizio germinale che si svilupperà in singoli ovociti. Il materiale iniettato nella gonade distale sarà incorporato in quegli ovociti e influenzerà la generazione successiva.

Dopo aver iniettato le viti senza fine, sostituire l'olio con un tampone M9. Una volta che i vermi iniziano a muoversi, trasferiscili su una piastra di agar NGM con cibo batterico. Nel seguente protocollo, il metodo di microiniezione delle gonadi viene utilizzato per fornire un complesso Cas9 per mirare e mo