Irradiazione UV: un metodo per integrare array extracromosomici

- La creazione di array di DNA extracromosomico mediante microiniezione, il metodo più semplice per generare ceppi di vermi transgenici, produce elementi genetici che non vengono trasmessi stabilmente durante la divisione cellulare e, quindi, mostrano tassi di ereditarietà e livelli di espressione variabili. L'obiettivo dell'integrazione dell'array in un cromosoma è quello di ridurre questa instabilità e variabilità genetica.

Per fare ciò, inizia con una popolazione sincronizzata per età di vermi transgenici L4, che trasportano un array extracromosomico precedentemente introdotto mediante microiniezione e consentono loro di crescere in adulti gravidi. Trasferisci questi adulti in nuovi piatti e lascia che depongano le uova fino a quando non ci sono almeno 30 uova su ogni piatto. Togliete gli adulti e lasciate che le uova crescano fino a raggiungere lo stadio L4. Quindi, irradiare i vermi con luce UV. Ciò provoca rotture casuali a doppio filamento nel DNA genomico in cui il meccanismo di riparazione del DNA dei vermi può incorporare arbitrariamente l'array.

Dopo un periodo di recupero notturno, conta il numero di vermi sopravvissuti. Una piccola percentuale di vermi morti indica un'