Rilevamento di ROS con colorazione DCFH-DA: misurazione dei ROS totali nelle linee cellulari di cancro del colon-retto

- Le specie reattive dell'ossigeno sono prodotte prevalentemente dai mitocondri quando gli elettroni fuoriescono dalla catena di trasporto degli elettroni. Questi elettroni si combinano con l'ossigeno molecolare dando origine a varie specie reattive dell'ossigeno, o ROS. Nelle cellule tumorali c'è una sovrapproduzione di specie reattive dell'ossigeno. Queste molecole di ROS altamente reattive possono danneggiare ossidativamente membrane, proteine e DNA all'interno della cellula.

L'aumento dei livelli di ROS danneggia il DNA portando all'attivazione di una via di segnalazione oncogenica che causa la progressione del cancro. Pertanto, è fondamentale rilevare i livelli di specie reattive dell'ossigeno prodotte dalle cellule tumorali.

Inizia prelevando cellule tumorali dal cancro del colon-retto umano in un terreno di coltura appropriato. Quindi, seminare queste cellule in una piastra multipozzetto e aggiungere la soluzione DCFH-DA. Incubare la piastra per la durata desiderata. Il DCFH-DA attraversa la membrana cellulare. Una volta all'interno della cellula, il DCFH-DA si converte in DCFH in presenza di un enzima esterasi cellulare. Inoltre, l'ossidazione del DCFH da parte delle specie