Estrazione di miRNA circolanti: un metodo per isolare i miRNA da campioni di plasma tramite estrazione organica e arricchimento di piccoli RNA

- I microRNA o miRNA sono piccoli RNA non codificanti che regolano l'espressione genica degradando l'mRNA o bloccando la loro traduzione in proteine funzionali. I miRNA circolanti sono potenziali biomarcatori del cancro e possono essere estratti dai fluidi corporei come il plasma. Per iniziare, mescolare il plasma con una soluzione denaturante che contemporaneamente omogeneizza il campione e inibisce le ribonucleasi che degradano l'RNA.

Trattare con fenolo-cloroformio acido e centrifugare per separare il campione in due fasi, una fase organica inferiore contenente DNA e proteine e una fase acquosa superiore contenente RNA. Recuperare la fase acquosa. Aggiungere etanolo assoluto per far precipitare l'RNA dalla soluzione.

Portare la concentrazione di etanolo del campione al 25% per impostare una condizione iniziale che favorisca una grande separazione dell'RNA. Trasferire la miscela in una cartuccia filtrante preassemblata e centrifugare. Gli RNA più grandi si immobilizzano selettivamente sul filtro, mentre i miRNA più piccoli si raccolgono nel filtrato.

Successivamente, aumentare la concentrazione di etanolo al 55% per favorire l'isolamento dei miRNA. Trasferire il filtrato in una n