JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 5:19 min. • April 30th, 2023
- Iniziare prendendo un topo mutante condizionale anestetizzato con un genoma modificato che trasporta specifiche sequenze di riconoscimento dell'enzima Cre-ricombinasi chiamate inserti LoxP che fiancheggiano il gene oncosoppressore desiderato da mutare. Esporre chirurgicamente la cavità addominale. Individuare il colon distale e bloccarne la parte superiore. Inserire per via transanale un tubo di grado medico e farlo avanzare nel colon distale. Sciacquare il colon con soluzione fisiologica per rimuovere qualsiasi materia fecale. Sostituire il tubo. Bloccare la regione inferiore del colon per la segmentazione. Gonfiare il segmento utilizzando una soluzione di dissociazione cellulare adatta. Questo perfora la barriera mucosa e aumenta l'accessibilità delle cellule della cripta intestinale. Svuotare la soluzione di dissociazione.
Quindi, iniettare una sospensione adenovirale nel segmento del colon. Questi vettori virali ingegnerizzati codificano per gli enzimi Cre-ricombinasi. Il virus entra nella cellula, rilascia il suo DNA nel nucleo ed esprime gli enzimi. Le proteine riconoscono gli inserti di LoxP nel genoma dell'ospite e catalizzano la ricombinazione sito-specifica, inattivando
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