Isolamento CTC da un campione di sangue intero: un metodo per ottenere CTC da un modello di cancro colorettale murino

- Le cellule tumorali circolanti, o CTC, sono le cellule tumorali che derivano dal tumore primario ed entrano nella circolazione sanguigna. La maggior parte delle CTC può sopravvivere nel flusso sanguigno senza attaccarsi alla superficie; Pertanto, possiamo rilevarli direttamente dal sangue della maggior parte dei pazienti oncologici.

Le CTC nel sangue possono indicare la diffusione del tumore all'interno del corpo, quindi identificarle aiuta a comprendere la progressione del cancro. Inizia prendendo un modello murino di cancro del colon-retto anestetizzato e ottieni il sangue mediante puntura cardiaca. Trasferire il sangue in una provetta conica contenente un mezzo a gradiente di densità e centrifugare per separare i componenti del sangue.

Scartare lo strato più superficiale contenente plasma e raccogliere la frazione di cellule mononucleate del sangue periferico, o PBMC, presente all'interfaccia in una provetta separata. Successivamente, aggiungere l'anticorpo anti-EpCAM alle cellule PBMC e osservare al microscopio a fluorescenza. Le CTC circolanti esprimono un marcatore cellulare noto come molecola di adesione cellulare epiteliale o EpCAM. Pertanto, gli anticorpi anti-EpCAM poss